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ELISA是目前應(yīng)用zui廣泛的一種免疫學測定方法。它是以物理方法將抗體或抗原吸附在固相載體上進行的免疫酶測定試驗。·ELlSA檢測NDV抗原是研究zui多進展zui快的技術(shù),各種EL/SA在NDV抗原檢測及抗體測中得到廣泛應(yīng)用??导俗蔚扔肊LISA抗原試劑盒對經(jīng)NDVF48E8強毒株攻擊后發(fā)病致死雞的內(nèi)臟樣品、泄殖腔棉拭和自然發(fā)病雞的口腔、泄殖腔、嗦囊棉拭進行了檢測,結(jié)果表明該試劑盒快速特異,并可同時檢出大量樣品。
P.Ramadass等用山羊抗兔辣根過氧化物酶結(jié)合物以Dot-ELISA法對禽糞便和組織懸液樣品進行NDV的檢側(cè),僅需30rain就能完成試驗,并且其靈敏度與間接熒光抗體試驗相似。
曹殿軍等用辣根過氧化銜酶
于圣青等從10株抗雞NDV特異性單克隆抗體中篩選出2株,分別用作包被抗體和酶標抗體而建立的McAbs—夾心ELISA試驗,對提純NDV的zui小檢出量為25ng/ml病毒蛋白,并從臨床疑似ND的724只病雞的口腔棉拭樣品中共檢出陽性502只,其中800個樣品與病毒分離試驗結(jié)果*一致。
盧建紅等以抗NDV單抗夾心ELISA試驗為基礎(chǔ),建立了PEG-ELISA法,并用于臨床診斷樣品NDV的檢測,結(jié)果·PEG—ELISA法的檢出率比McAbs夾心ELISA法提高了3%。
吳紅專等用HRP標記F23單抗制備的單抗ELISA試劑盒,在華東地區(qū)部分雞場進行NDV強毒感染的監(jiān)測結(jié)果表明該試劑盒的監(jiān)測結(jié)果與病毒分離的陽性符合率為100%,陰性符合率為96.7%。
高云英等用過碘酸鈉法標記辣根過氧化物酶與單克隆抗體制備結(jié)合物對NDV強毒感染瀕死雞的5種組織臟器以雙抗夾心ELISA法進行NDV抗原檢測,檢出率均在80%以上,與直接熒光抗體試驗比較,對人工感染病例的檢出符合率為100%,且具有敏感性高、特異性強、快速簡便等優(yōu)點。
另外ELISA法也用于ND抗體的監(jiān)測,姜平等應(yīng)用dot—ELISA檢測ND血清,并與常規(guī)ELISA、HI法相比較,結(jié)果表明,該法用于ND抗體檢測,其特異性和敏感性均優(yōu)于常規(guī)ELlSA和HI,且克服了常規(guī)ELISA設(shè)備要求昂貴和HI敏感性低等缺點。
ELISA法雖然存在著試劑純度和酶結(jié)合物的特異性、結(jié)果陽性判定標準的確定等問題有待解決,但由上述可見,其與單克隆抗體相結(jié)合并標準化、試劑盒化,已成為臨床上ND診斷和監(jiān)測的一個重要發(fā)展方向。