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當(dāng)前位置:上海乾思生物科技有限公司>>技術(shù)文章>>α干擾素ELISA試劑盒 ELISA試劑盒真?zhèn)伪鎰e
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋原則: 2 瓶,每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至 1ml ,蓋好后靜置 10 分鐘以上,然后反復(fù)顛倒 / 搓動(dòng)以助溶解,其濃度為 300 pg/ml ,做系列倍比稀釋后,分別稀釋 300 pg/ml , 150 pg/ml , 75 pg/ml , 37.5 pg/ml , 18.5 pg/ml , 9 pg/ml , 4.5 pg/ml ,樣品稀釋液直接作為標(biāo)準(zhǔn)濃度 0 pg/ml ,臨用前 15 分鐘內(nèi)配制。 如配制 150 pg/ml 標(biāo)準(zhǔn)品:取 0.5ml (不要少于 0.5ml ) 300 pg/ml 的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含 0.5ml 樣品稀釋液的 Eppendorf 管中,混勻即可,其余濃度以此類(lèi)推。 生物素標(biāo)記抗體的稀釋原則: 臨用前以生物素標(biāo)記抗體稀釋液稀釋?zhuān)♂屒案鶕?jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(每孔 100 μ l ),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制 0.1-0.2ml 。如 10 μ l 生物素標(biāo)記抗體加 990 μ l 生物素標(biāo)記抗體稀釋液的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則: 臨用前以辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋?zhuān)♂屒案鶕?jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制(每孔 100 μ l ),實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制 0.1-0.2ml 。如 10 μ l 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素加 990 μ l 辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 的比例配制,輕輕混勻,在使用前一小時(shí)內(nèi)配制。
人類(lèi)成纖維細(xì)胞(多種種屬)實(shí)驗(yàn)科研認(rèn)可品牌
α干擾素ELISA試劑盒
檢測(cè)范圍:歡迎QQ或電話索取原版說(shuō)明書(shū).
產(chǎn)品規(guī)格:96T/48T。
主要成分:酶標(biāo)板,試劑,標(biāo)準(zhǔn)品等
經(jīng)營(yíng)種類(lèi):進(jìn)口分裝和原裝、國(guó)產(chǎn)
性狀:盒裝液體
試劑盒保存:2-8℃低溫保存。
標(biāo)本:血清、細(xì)胞上清液、尿液、體液、灌洗液、腦脊髓、心房水、胸房水、組織等。
ELISA常用的方法:雙抗體夾心法、間接法、競(jìng)爭(zhēng)法以及BAS-ELISA等。
預(yù)期應(yīng)用:ELISA法定量測(cè)定血清、、細(xì)胞培養(yǎng)上清或其它相關(guān)生物液體中的含量。
●分子實(shí)驗(yàn)中常用生化試劑原理匯總● 1.溶菌酶:它是糖苷水解酶,能水解菌體細(xì)胞壁的主要化學(xué)成分肽聚糖中的β-1,4糖苷鍵,因而具有溶菌的作用。當(dāng)溶液中pH小于8時(shí),溶菌酶作用受到抑制。葡萄糖:增加溶液的粘度,維持滲透壓,防止DNA受機(jī)械剪切力作用而降解。 EDTA:(1)螯合Mg2+、Ca2+等金屬離子,抑制脫氧核糖核酸酶對(duì)DNA的降解作用(DNase作用時(shí)需要一定的金屬離子作輔基);(2)EDTA的存在,有利于溶菌酶的作用,因?yàn)槿芫傅姆磻?yīng)要求有較低的離子強(qiáng)度的環(huán)境。 2.NaOH-SDS液: NaOH:核酸在pH大于5,小于9的溶液中,是穩(wěn)定的。但當(dāng)pH>12或pH<3時(shí),就會(huì)引起雙鏈之間氫鍵的解離而變性。在溶液II中的NaOH濃度為0.2mo1/L,加抽提液時(shí),該系統(tǒng)的pH就高達(dá)12.6,因而促使染色體DNA與質(zhì)粒DNA的變性。 SDS:SDS是離子型表面活性劑。它主要功能有:(1)溶解細(xì)胞膜上的脂質(zhì)與蛋白,因而溶解膜蛋白而破壞細(xì)胞膜。(2)解聚細(xì)胞中的核蛋白。(3)SDS能與蛋白質(zhì)結(jié)合成為R-O-SO3-…R+-蛋白質(zhì)的復(fù)合物,使蛋白質(zhì)變性而沉淀下來(lái)。但是SDS能抑制核糖核酸酶的作用,所以在以后的提取過(guò)程中,必須把它去除干凈,防止在下一步操作中(用RNase去除RNA時(shí))受到干擾。 3. 3mol/L NaAc(pH4.8)溶液: NaAc的水溶液呈堿性,為了調(diào)節(jié)pH至4.8,必須加入大量的冰醋酸。所以該溶液實(shí)際上是NaAc-HAc的緩沖液。用pH4.8的NaAc溶液是為了把pH12.6的抽提液,調(diào)回pH至中性,使變性的質(zhì)粒DNA能夠復(fù)性,并能穩(wěn)定存在。而高鹽的3mol/L NaAc有利于變性的大分子染色體DNA、RNA以及SDS-蛋白復(fù)合物凝聚而沉淀之。前者是因?yàn)橹泻秃怂嵘系碾姾?,減少相斥力而互相聚合,后者是因?yàn)殁c鹽與SDS-蛋白復(fù)合物作用后,能形成較小的鈉鹽形式復(fù)合物,使沉淀更*。 4.為什么用無(wú)水乙醇沉淀DNA?用無(wú)水乙醇沉淀DNA,這是實(shí)驗(yàn)中常用的沉淀DNA的方法。乙醇的優(yōu)點(diǎn)是可以任意比和水相混溶,乙醇與核酸不會(huì)起任何化學(xué)反應(yīng),對(duì)DNA很安全,因此是理想的沉淀劑。 DNA溶液是DNA以水合狀態(tài)穩(wěn)定存在,當(dāng)加入乙醇時(shí),乙醇會(huì)奪去DNA周?chē)乃肿?,使DNA失水而易于聚合。一般實(shí)驗(yàn)中,是加2倍體積的無(wú)水乙醇與DNA相混合,其乙醇的終含量占67%左右。因而也可改用95%乙醇來(lái)替代無(wú)水乙醇(因?yàn)闊o(wú)水乙醇的價(jià)格遠(yuǎn)遠(yuǎn)比95%乙醇昂貴)。但是加95%的乙醇使總體積增大,而DNA在溶液中有一定程度的溶解,因而DNA損失也增大,尤其用多次乙醇沉淀時(shí),就會(huì)影響收得率。折中的做法是初次沉淀DNA時(shí)可用95%乙醇代替無(wú)水乙酵,后的沉淀步驟要使用無(wú)水乙醇。也可以用0.6倍體積的異丙醇選擇性沉淀DNA。一般在室溫下放置15-30分鐘即可。
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編輯:小檀20181019
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