產(chǎn)品分類:結(jié)締染色
儲存條件:4℃,避光,12個月
用途:區(qū)分結(jié)締組織蛋白多糖中是否硫酸軟骨素和透明質(zhì)酸
注意事項:根據(jù)透明質(zhì)酸酶可以裂解透明質(zhì)酸和硫酸軟骨素的糖苷鍵這一特性,同時聯(lián)合使用阿利新藍(lán)染色液,使上述物質(zhì)不著色,而未處理的呈亮藍(lán)色,該法需要做陽性對照。
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
透明質(zhì)酸染色液 | 2×50ml | FS-R6726 |
配制與標(biāo)定的實驗原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線,搖勻。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱;柱溫120℃;進(jìn)樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進(jìn)樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應(yīng)不低于10000。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細(xì)胞50-500μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實現(xiàn),至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細(xì)胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
洋川芎內(nèi)酯I(標(biāo)準(zhǔn)品) L-Alanamine Hydrochloride絲/蘇蛋白激蛋白抗體包裝25g
洋薊;1,5-二咖啡酰奎寧(標(biāo)準(zhǔn)品) L-Histidine monohydrate monohydrochlorideHAUS5蛋白抗體包裝1ml
氧代川南亭堿(標(biāo)準(zhǔn)品) L-Homoarginine Hydrochloride 組織H4受體抗體包裝1ml
氧化白藜蘆(標(biāo)準(zhǔn)品) TPCKmRNA cap基轉(zhuǎn)移抗體包裝1ml
氧化白藜蘆-2-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 TPCK5’-三磷聚核苷抗體包裝1g
氧化白藜蘆-3'-O-β-D-吡喃葡萄糖苷 Ala-Gln 組三聚體核苷結(jié)合蛋白1抗體包裝25g
氧化(標(biāo)準(zhǔn)品) H-Arg-OMe·2HCl狀腺促進(jìn)激alpha鏈包裝5g
氧化槐果堿(標(biāo)準(zhǔn)品) D-Alaninamide hydrochlorideA型流感病H7N9凝集抗體包裝1g
氧化(標(biāo)準(zhǔn)品) Fenticonazole Nitrate組蛋白去乙?;?抗體包裝250mg
氧化前胡(標(biāo)準(zhǔn)品) 1-Benzyl D-Glutamate人乙肝表面抗原抗體(包被)包裝5g
氧化芍藥苷,羥基芍藥苷(標(biāo)準(zhǔn)品) D-Phenylalanine 腎損傷分子1抗體(型肝炎病受體1)包裝1ml
藥根堿(標(biāo)準(zhǔn)品) D-Alanine組富含脯糖蛋白抗體包裝1ml
野百合堿(標(biāo)準(zhǔn)品) β-AlanineHER3受體抗體包裝100g
野(標(biāo)準(zhǔn)品) β-Alanine磷化HER3受體抗體包裝25g
野黃芩(標(biāo)準(zhǔn)品) D-Tryptophan磷化HER3受體抗體包裝100g
強(qiáng)酒海桿菌Marinobacter│vinifirmus 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98.0% ,標(biāo)準(zhǔn)品卵巢癌抗原X1試劑盒;Caffeine
陰溝腸桿菌Enterobacter│cloacae 質(zhì)量規(guī)格:>99%,AR離子胞內(nèi)通道蛋白4試劑盒比多巴;S-(-)-Carbidopa
: AS4.867資源名稱: 天藍(lán)色鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR綠膿桿菌外A試劑盒基異茜草;Rubiadin、 1,3
透明質(zhì)酸染色液BKCa channels(calcium-activated potassium channel) 鈣激活鉀通道蛋白規(guī)格: 0.5mg
BTG2/TIS21(B-cell translocation gene 2) BTG2(抗原)規(guī)格: 0.5mg
C-fos(i mmediate early gene, ieg) 即刻早期基因(是一種原癌基因)抗原規(guī)格: 0.5mg
C-jun/AP-1 (Oncoprotein C-jun:active protein 1) 原癌基因蛋白(活化蛋白1)(抗原)規(guī)格: 0.5mg
cyclin D1 周期suD1(抗原)規(guī)格: 0.5mg