詳細介紹
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
產(chǎn)品名稱 | 電壓依賴性鈣通道Cav3.1抗體 |
英文名稱 | CACNA1G |
規(guī)格 | 0.1ml |
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公司專業(yè)供應(yīng)的抗體,抗體是用于化學反應(yīng)、分析化驗、研究實驗、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,產(chǎn)品品質(zhì),價格實惠,多種規(guī)格供應(yīng),售后完善??贵w的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標記技術(shù):
(一)原理
當應(yīng)用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應(yīng)的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
多巴胺D2受體(D2R)核盤菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
神經(jīng)元凋亡抑制蛋白(NAIP) 芽胞桿菌ATCC 9372;(曾用名:枯草芽胞桿菌黑色變種)拉丁屬名: Bacillus atrophaeus
食欲素/阿立新B(OX-B)枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus subtilis
促睡眠肽(DSIP)戊糖乳桿菌拉丁屬名: Lactobacillus pentosus
精氨酸加壓素(AVP) 枯草芽孢桿菌拉丁屬名: Bacillus subtilis
垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽(PACAP)拱狀靈芝拉丁屬名: Ganoderma fornicatum
微管相關(guān)蛋白2(MAP-2)*灰葡萄孢用途: 進行分析檢測及抗病性鑒定,指導。
神經(jīng)絲蛋白(NF)Chitinophagaceae sp.拉丁屬名: Chitinophagaceae sp.
利尿肽(KP) 巴氏醋桿菌巴氏亞種拉丁屬名: Acetobacter pasteurianus subsp. pasteurianus
神經(jīng)降壓素(NT) 阪崎腸桿菌拉丁屬名: Enterobacter sakazakii
γ肽(Pγ)類干酪乳桿菌拉丁屬名: Lactobacillus paracasei
C型鈉尿肽(CNP)囊狀匐柄霉拉丁屬名: Stemphylium vesicarium
阿立新A(Orexin A)香菇用途: 食用、藥用
腦腸肽(BGP/Gehrelin)蘇云金芽孢桿菌注意事項: 僅用于科學研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
前心鈉肽(Pro-ANP)參土地桿菌拉丁屬名: Pedobacter ginsengisoli
制瘤素M受體(OSMR)Rhizobium vitis用途: 植物冠癭病害,遺傳轉(zhuǎn)化材料
電壓依賴性鈣通道Cav3.1抗體組蛋白替換精蛋白DGGR1抗體(+)-Perillaldehyde中文名:(+)-紫蘇醛別名:分子式:C10H14O
透明質(zhì)酸及粘蛋白4抗體8,9-Dehydrothymol isobutyrate中文名:8,9-去氫百里香酚異丁酯別名:分子式:C14H18O2
熱休克蛋白90α/HSP90 α抗體Thymol isobutyrate中文名:百里香酚異丁酯別名:Thymyl isobutyrate分子式:C14H20O2
心臟和神經(jīng)嵴衍生蛋白1抗體Dicliripariside A中文名:別名:分子式:C32H48O14
雌激素下調(diào)基因1蛋白抗體8-Hydroxy-9,10-diisobutyryloxythymol中文名:8-羥基-9,10-二異丁酰氧基麝香草酚別名:分子式:C18H26O6