詳細介紹
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
產(chǎn)品名稱 | HIV-1病毒復制結(jié)合蛋白2抗體 |
英文名稱 | AGFG2 |
規(guī)格 | 0.2ml |
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公司專業(yè)供應的抗體,抗體是用于化學反應、分析化驗、研究實驗、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,產(chǎn)品品質(zhì),價格實惠,多種規(guī)格供應,售后完善。抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標記技術(shù):
(一)原理
當應用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應完成即將混合液移入他管終止反應。
(二)準備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
L谷英文名稱:Lglutamic acid保存:20℃,避光規(guī)格:100mg四分子交聯(lián)體3一抗(四旋蛋白)
虎杖苷(白黎蘆苷)英文名稱:Polydatin (polydatin)保存:20℃,避光規(guī)格:20mgTTC33蛋白一抗
紫香苷英文名稱:Syringin保存:20℃,避光規(guī)格:20mg轉(zhuǎn)錄增強因子TEF3一抗
雷公藤素(雷公藤內(nèi))英文名稱:Triptolide (triptolide)保存:20℃,避光規(guī)格:20mg核轉(zhuǎn)錄因子25一抗
金利油英文名稱:Jinli oil保存:20℃,避光規(guī)格:0.2ml原肌球蛋白1一抗
豬牙皂英文名稱:Fructus Gleditsiae保存:20℃,避光規(guī)格:0.5gT淋巴細胞白血病同源蛋白2一抗
青黛英文名稱:Indigo naturalis保存:20℃,避光規(guī)格:1g跨膜蛋白132A一抗
骨碎補英文名稱:Rhizoma Drynariae保存:20℃,避光規(guī)格:0.25g四聚體多肽蛋白21B一抗
蒼耳子英文名稱:Fructus Xanthii保存:20℃,避光規(guī)格:1g辣椒素受體3一抗
地錦草英文名稱:Herba euphorbiae humifusae保存:20℃,避光規(guī)格:1gTEX261蛋白一抗
百蕊草英文名稱:Thesium chinense Turcz.保存:20℃,避光規(guī)格:1gp53誘導蛋白5一抗
化橘紅英文名稱:Hua Juhong保存:20℃,避光規(guī)格:3gUNC80蛋白一抗
馬錢子英文名稱:Nux vomica保存:20℃,避光規(guī)格:1g突觸融合蛋白結(jié)合蛋白5一抗
瑞格列奈英文名稱:Repaglinide保存:20℃,避光規(guī)格:0.5gβtaxilin蛋白一抗
西沙必利英文名稱:Cisapride保存:20℃,避光規(guī)格:100mg干燥綜合征相關(guān)蛋白2一抗
哌喹英文名稱:Piperaquine phosphate保存:20℃,避光規(guī)格:100mg狀腺激素受體相互作用蛋白4一抗
阿昔莫司英文名稱:Acipimox保存:20℃,避光規(guī)格:100mg腫瘤壞死因子α誘導相互作用蛋白3一抗
HIV-1病毒復制結(jié)合蛋白2抗體Oospora sp.提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領(lǐng)域: 抑菌活性培養(yǎng)基: CM0014生長條件: 28C存儲條件: 真空冷凍干燥
Bacillus firmus分離基物: 土樣提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 2生長條件: 37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;其他
Streptomyces longisporoflavus分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領(lǐng)域: 產(chǎn)生代謝產(chǎn)物具有抑菌活性培養(yǎng)基: 0012生長條件: 28℃存儲條件: 礦物油法
Agrobacterium tumefaciens提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0065生長條件: 28℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;礦物油法
Russula vinosa Lindblad分離基物: 組織塊提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no培養(yǎng)基: 150生長條件: 25-30存儲條件: 定期移植法
Bacillus thuringiensis分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法
Streptomyces sp.分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應用領(lǐng)域: 活性物質(zhì),次核苷酸脫氫酶抑制活性培養(yǎng)基: CM0038生長條件: 28C存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)
Pleurotus ostreatus提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25℃
枯草芽孢桿菌種屬: Bacillus subtilis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 79生長條件: 37℃存儲條件: 真空冷凍干燥法