公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點,咨詢并訂購!
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
核固紅染色液 | 100ml | FS-R6730 |
產(chǎn)品分類:結(jié)締染色
儲存條件:室溫,避光,12個月
用途:細胞核、網(wǎng)狀纖維染色,常用于復染
注意事項:主要由核固紅、去離子水組成。
配制與標定的實驗原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑,基準試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標線,搖勻。
實驗方法與判定:
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制:精密量取腦對照品適量,加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱;柱溫120℃;進樣口溫度250℃;檢測器溫度250℃;分流進樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應(yīng)不低于10000。
4.實驗方法:配制的對照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液,三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來,保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%,驗證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
異黃芪皂苷II(標準品) Tianeptine sodium salt硫乙酰肝6腦苷脂轉(zhuǎn)硫1抗體包裝250mg
異黃芪皂苷IV(標準品) D-Glutamine 神經(jīng)保護肽HN抗體包裝5g
異茴芹內(nèi)酯(標準品) Zaltoprofen大鼠細小病H-1株(H-1)抗體(N端)包裝100g
異苦參 Sodium Glycocholate Hydrate透明質(zhì)合成1抗體包裝25g
異類葉升麻苷;異毛蕊花糖苷(標準品) Mannitol;D-Mannitol缺氧誘導因子3α/HIF-3α抗體包裝1g
異蓮心堿(標準品) D-Cysteine hydrochloride monohydrate缺氧誘導因子脯酰4羥化抗體包裝5g
異綠原A(標準品) Calpain Inhibitor II(ALLM)透明質(zhì)2/玻璃2抗體包裝100g
異綠原B(標準品) Ethisterone心臟鈣粘蛋白抗體包裝25g
異綠原C(標準品) Ethisterone17-β-羥脫氫6抗體包裝5g
異羅漢果皂苷 V D-CystineH5亞型全病抗體包裝1g
異芒果苷(標準品) DL-Tryptophan人類皰疹病8 ORF14抗體包裝250mg
異牡荊(標準品) DL-Serine透明質(zhì)2/玻璃2抗體包裝25MG
異南五味子木脂寧 L-Methionine同源盒蛋白B2抗體包裝250mg
異歐前胡(標準品) DL-Phenylalanine同源盒蛋白B8抗體包裝5mg
異皮啶(標準品) DL-Asparagine monohydrate熱休克蛋白70家族蛋白6抗體包裝10mg
球孢白僵菌Beauveria│bassiana 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%,熔點18硫軟骨N-乙酰半乳糖基轉(zhuǎn)移1試劑盒苦杏仁苷;Amygdalin
43846=ATCC33205=IFO14230=JCM3312=KCCA-0312=NBRC14230資源名稱: 中間型高溫放線菌 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR硫軟骨試劑盒假荊芥屬苷;Nepitrin
埃及曲霉Aspergillus│egyptiacus 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR硫皮膚-硫軟骨PG試劑盒5-O-維阿斯米;5-O-Methy
核固紅染色液CD133 gen 造血干細胞抗原(多肽抗原)規(guī)格: 0.5mg
CD147/EMMPRIN(Extracellular matrix metalloproteinase inducer) CD147(抗原)規(guī)格: 0.5mg
CD169/sialoadhesin(Sn)(Sialic acid-binding Ig-like lectin 1;Siglec-1) CD169抗原規(guī)格: 0.5mg
CD272/BTLA(B and T lymphocyte attenuator) B 和 T 淋巴細胞衰減蛋白(抗原)規(guī)格: 0.5mg
CDK2 (Cyclin-Dependent Kinase 2) 周期su依賴激mei2(抗原)規(guī)格: 0.5mg
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型,培養(yǎng)基,生長條件和細胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動物細胞50-500μg/mL;細菌/植物細胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細胞的抗生素濃度,可通過建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來實現(xiàn),至少選擇5個濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過夜;注:對于需要更高密度來檢測活力的細胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。
4) 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密,其效率會降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細胞稀釋至豐度不超過25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評估細胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間,這取決于宿主細胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。