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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司 |
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| 參考價(jià) | 面議 |
更新時(shí)間：2022-06-10 16:06:55瀏覽次數(shù)：287
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| 供貨周期 | 現(xiàn)貨 | 規(guī)格 | 50管/24樣 |
|---|---|---|---|
| 貨號(hào) | AS63211 | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 化工 |
| 主要用途 | 僅供科研 | 檢測(cè)方法 | 可見分光光度法 |
商品屬性：
| 產(chǎn)品名稱 | 輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒50管/24樣 |
| 檢測(cè)方法 | 可見分光光度法 |
| 產(chǎn)品規(guī)格 | 50管/24樣 |
| 產(chǎn)品貨號(hào) | AS63211 |
商品介紹：
| 測(cè)定意義 輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中，NAD+是糖酵解（EMP）和三羧酸循環(huán)（TCA）的主要?dú)涫荏w，生成的NADH經(jīng)呼吸電子鏈（ETC）傳遞把電子交給氧，在合成ATP的同時(shí)，形成大量的ROS，同時(shí)NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質(zhì)三大代謝物質(zhì)分解中的氧化反應(yīng)絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評(píng)價(jià)糖酵解和TCA循環(huán)的強(qiáng)弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細(xì)胞呼吸耗氧量較高，處于過氧化狀態(tài)。此外，NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外，NAD+降解產(chǎn)物對(duì)細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)、代謝和基因表達(dá)等具有重要的調(diào)控作用。 測(cè)定原理 分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH，NADH通過PMS的遞氫作用，還原氧化型噻唑藍(lán)（MTT）為甲瓚，在570nm下檢測(cè)吸光值；而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH，進(jìn)一步采用MTT還原法檢測(cè)。 需自備的儀器和用品 可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制：
酸性提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；堿性提取液：液體50mL×1瓶，4℃保存；試劑一：液體10 mL×1瓶，4℃保存；試劑二：液體3 mL×1瓶，4℃保存；試劑三：粉劑×1瓶，-20 ℃保存，用時(shí)加入3mL蒸餾水，混勻，用不完的試劑4℃保存一周；試劑四：粉劑×1瓶，4 ℃保存，用時(shí)加入3mL蒸餾水，混勻，用不完的試劑4℃保存一周；試劑五：液體3.6mL×1瓶，4 ℃保存；試劑六：液體30mL×1瓶，4 ℃保存；試劑七：液體50mL×1瓶，4 ℃保存。
自備儀器和用品：
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提?。?/p>
1、血清（漿）中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{）體積（ml）：酸性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建 議取約0.1ml血清（漿），加入1ml酸性提取液），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）； 冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl堿性提取液使之中 和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。 NADH的提取：按照血清（漿）體積（ml）：堿性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建 議取約0.1ml血清（漿），加入1ml堿性提取液），95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）； 冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中 和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提取： NAD+的提取：按照組織質(zhì)量（g）：酸性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建議取約0.1g 組織，加入1ml酸性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴 中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。 NADH的提取：按照組織質(zhì)量（g）：堿性提取液體積（ml）為1：5~10的比例（建議取約0.1g 組織，加入1ml堿性提取液），冰浴研磨，95℃水浴5min（蓋緊，以防止水分散失）；冰浴 中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加入500μl酸性提取液使之中和， 混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提取： NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，棄上清，按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：酸性 提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液）， 超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次），95℃水浴5min （蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加 入500μl堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。 NADH的提取：先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi)，棄上清，按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量（104個(gè)）：堿 性提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液）， 超聲波破碎（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次），95℃水浴5min （蓋緊，以防止水分散失）；冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心10min；取500μl上清液，加 入500μl酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4 ℃離心10min，取上清，置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作：
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm，蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四，迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化，分別記錄15s和75s時(shí)吸光值，分別記為A1和A2?！鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管：在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四，迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化，分別記錄15s和75s時(shí)吸光值，分別記為A3和A4?！鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意：空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng)：
①加入試劑的順序應(yīng)一致，以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測(cè)試劑盒說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā)，避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感，避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸，有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干，不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染，吸取終止液和底物A、B液時(shí)，避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中，密封保存，以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存，使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄，不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
6磷酸葡萄糖酸脫氫酶（6PGDH）測(cè)試盒50管/48樣 輔酶Ⅱ系列
肌酸激酶(CK)測(cè)試盒100管/96樣 輔酶Ⅱ系列
肌酸激酶(CK)測(cè)試盒50管/48樣 輔酶Ⅱ系列
脂肪酸合成酶（FAS）測(cè)試盒100管/96樣 輔酶Ⅱ系列
脂肪酸合成酶（FAS）測(cè)試盒10管/9樣 輔酶Ⅱ系列
脂肪酸合成酶（FAS）測(cè)試盒25管/24樣 輔酶Ⅱ系列
脂肪酸合成酶（FAS）測(cè)試盒50管/48樣 輔酶Ⅱ系列
蔗糖磷酸化酶(SP)測(cè)試盒100管/96樣 輔酶Ⅱ系列
蔗糖磷酸化酶(SP)測(cè)試盒50管/48樣 輔酶Ⅱ系列
硫氧還蛋白氧化還原酶（TrxR）測(cè)試盒100管/96樣 輔酶Ⅱ系列
硫氧還蛋白氧化還原酶（TrxR）測(cè)試盒50管/48樣 輔酶Ⅱ系列
還原酶（GR）測(cè)試盒100管/96樣 輔酶Ⅱ系列
還原酶（GR）測(cè)試盒50管/48樣 輔酶Ⅱ系列
還原型（GSH）測(cè)試盒100管/96樣 系列
還原型GSH）測(cè)試盒50管/48樣 列
氧化型GSSG）含量測(cè)試盒100管/96樣 系列
氧化型GSSG）含量測(cè)試盒50管/48樣 列
過氧化物酶（GPX）測(cè)試盒100管/96樣 系列
過氧化物酶（GPX）測(cè)試盒50管/48樣 列
硫氧還蛋白過氧化物酶（TPX）測(cè)試盒100管/96樣 系列
硫氧還蛋白過氧化物酶（TPX）測(cè)試盒50管/48樣 系列
轉(zhuǎn)移酶（GST）測(cè)試盒100管/96樣 系列
T3鯊 魚三碘甲狀腺原氨酸酶聯(lián)免疫試劑盒 T3 ELISA Kit
Cortisol鯊 魚酶聯(lián)免疫試劑盒 Cortisol ELISA Kit
T4鯊 魚甲狀腺素酶聯(lián)免疫試劑盒 T4 ELISA Kit
T鯊 魚睪酮酶聯(lián)免疫試劑盒 T ELISA Kit
E2鯊 魚雌二醇酶聯(lián)免疫試劑盒 E2 ELISA Kit
NDM-1新德里超級(jí)細(xì)菌金屬β-內(nèi)酰胺酶-1酶聯(lián)免疫試劑盒 NDM-1 ELISA Kit
orexin小尾寒 羊增食欲素酶聯(lián)免疫試劑盒 orexin ELISA Kit
LEP小尾寒 羊瘦素酶聯(lián)免疫試劑盒 LEP ELISA Kit
POMC小尾寒 羊阿黑皮素原酶聯(lián)免疫試劑盒 POMC ELISA Kit
PMSG孕 馬血清酶聯(lián)免疫試劑盒 PMSG ELISA Kit
CORT犀 牛皮質(zhì)酮酶聯(lián)免疫試劑盒 CORT ELISA Kit
輔酶ⅠNAD(H)含量測(cè)試盒50管/24樣T田鼠睪酮酶聯(lián)免疫試劑盒 T ELISA Kit
MAPK絲裂原激活的蛋白激酶/MAP激酶酶聯(lián)免疫試劑盒 MAPK ELISA Kit
MAP2K5雙特異性絲裂原活化蛋白激酶5酶聯(lián)免疫試劑盒 MAP2K5 ELISA Kit
BPA雙酚A酶聯(lián)免疫試劑盒 BPA ELISA Kit
GC食蟹猴胰高血糖素酶聯(lián)免疫試劑盒 GC ELISA Kit
C-Peptide食蟹猴C肽酶聯(lián)免疫試劑盒 C-Peptide ELISA Kit
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