詳細介紹
商品屬性:
產品名稱 | 輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒50管/24樣 |
檢測方法 | 可見分光光度法 |
產品規(guī)格 | 50管/24樣 |
產品貨號 | AS63211 |
商品介紹:
測定意義 輔酶ⅠNAD(H)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中,NAD+是糖酵解(EMP)和三羧酸循環(huán)(TCA)的主要氫受體,生成的NADH經呼吸電子鏈(ETC)傳遞把電子交給氧,在合成ATP的同時,形成大量的ROS,同時NADH再生為NAD+。糖、脂、蛋白質三大代謝物質分解中的氧化反應絕大部分通過這一體系完成。NAD(H)含量和NADH/NAD+比值的高低可用于評價糖酵解和TCA循環(huán)的強弱。較高的NAD(H)及NADH/NAD+比值說明細胞呼吸耗氧量較高,處于過氧化狀態(tài)。此外,NADH/NAD+比值升高也可抑制糖酵解和TCA循環(huán)。另外,NAD+降解產物對細胞信號傳導、代謝和基因表達等具有重要的調控作用。 測定原理 分別用酸性和堿性提取液提取樣品中NAD+和NADH,NADH通過PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(MTT)為甲瓚,在570nm下檢測吸光值;而NAD+可被乙醇脫氫酶還原為NADH,進一步采用MTT還原法檢測。 需自備的儀器和用品 可見分光光度計、臺式離心機、移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見分光光度計、臺式離心機、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提?。?/p>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。 NADH的提取:按照血清(漿)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/p> NAD+的提?。喊凑战M織質量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。 NADH的提?。喊凑战M織質量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。 | 3、細胞或細菌中NAD+和NADH的提?。?/p> NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104個):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。 NADH的提?。合仁占毎蚣毦诫x心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104個):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。 |
ADH測定操作:
1. 分光光度計預熱30 min,調節(jié)波長到340 nm,蒸餾水調零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,分別記錄15s和75s時吸光值,分別記為A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 測定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,分別記錄15s和75s時吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測定管=A3-A4。
注意:空白管只需測定一次。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照雞血紅蛋白(HB)ELISA檢測試劑盒說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。
6磷酸葡萄糖酸脫氫酶(6PGDH)測試盒50管/48樣 輔酶Ⅱ系列
肌酸激酶(CK)測試盒100管/96樣 輔酶Ⅱ系列
肌酸激酶(CK)測試盒50管/48樣 輔酶Ⅱ系列
脂肪酸合成酶(FAS)測試盒100管/96樣 輔酶Ⅱ系列
脂肪酸合成酶(FAS)測試盒10管/9樣 輔酶Ⅱ系列
脂肪酸合成酶(FAS)測試盒25管/24樣 輔酶Ⅱ系列
脂肪酸合成酶(FAS)測試盒50管/48樣 輔酶Ⅱ系列
蔗糖磷酸化酶(SP)測試盒100管/96樣 輔酶Ⅱ系列
蔗糖磷酸化酶(SP)測試盒50管/48樣 輔酶Ⅱ系列
硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)測試盒100管/96樣 輔酶Ⅱ系列
硫氧還蛋白氧化還原酶(TrxR)測試盒50管/48樣 輔酶Ⅱ系列
還原酶(GR)測試盒100管/96樣 輔酶Ⅱ系列
還原酶(GR)測試盒50管/48樣 輔酶Ⅱ系列
還原型(GSH)測試盒100管/96樣 系列
還原型GSH)測試盒50管/48樣 列
氧化型GSSG)含量測試盒100管/96樣 系列
氧化型GSSG)含量測試盒50管/48樣 列
過氧化物酶(GPX)測試盒100管/96樣 系列
過氧化物酶(GPX)測試盒50管/48樣 列
硫氧還蛋白過氧化物酶(TPX)測試盒100管/96樣 系列
硫氧還蛋白過氧化物酶(TPX)測試盒50管/48樣 系列
轉移酶(GST)測試盒100管/96樣 系列
T3鯊 魚三碘甲狀腺原氨酸酶聯(lián)免疫試劑盒 T3 ELISA Kit
Cortisol鯊 魚酶聯(lián)免疫試劑盒 Cortisol ELISA Kit
T4鯊 魚甲狀腺素酶聯(lián)免疫試劑盒 T4 ELISA Kit
T鯊 魚睪酮酶聯(lián)免疫試劑盒 T ELISA Kit
E2鯊 魚雌二醇酶聯(lián)免疫試劑盒 E2 ELISA Kit
NDM-1新德里超級細菌金屬β-內酰胺酶-1酶聯(lián)免疫試劑盒 NDM-1 ELISA Kit
orexin小尾寒 羊增食欲素酶聯(lián)免疫試劑盒 orexin ELISA Kit
LEP小尾寒 羊瘦素酶聯(lián)免疫試劑盒 LEP ELISA Kit
POMC小尾寒 羊阿黑皮素原酶聯(lián)免疫試劑盒 POMC ELISA Kit
PMSG孕 馬血清酶聯(lián)免疫試劑盒 PMSG ELISA Kit
CORT犀 牛皮質酮酶聯(lián)免疫試劑盒 CORT ELISA Kit
輔酶ⅠNAD(H)含量測試盒50管/24樣T田鼠睪酮酶聯(lián)免疫試劑盒 T ELISA Kit
MAPK絲裂原激活的蛋白激酶/MAP激酶酶聯(lián)免疫試劑盒 MAPK ELISA Kit
MAP2K5雙特異性絲裂原活化蛋白激酶5酶聯(lián)免疫試劑盒 MAP2K5 ELISA Kit
BPA雙酚A酶聯(lián)免疫試劑盒 BPA ELISA Kit
GC食蟹猴胰高血糖素酶聯(lián)免疫試劑盒 GC ELISA Kit
C-Peptide食蟹猴C肽酶聯(lián)免疫試劑盒 C-Peptide ELISA Kit