孔雀綠指示劑

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點，咨詢并訂購！

產(chǎn)品分類：指示劑

儲存條件：室溫,避光,12個月

用途：單一酸堿指示劑，也稱作孔雀石綠指示劑

注意事項：孔雀綠第一變色范圍：pH0.13-0.20,顏色由黃色變淡綠色；第二變色范圍：pH11.5-13.2,顏色由藍綠色變?yōu)闊o色。

配制與標定的實驗原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑，基準試劑的預處理：稱量前一般應先用xi鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標線，搖勻。

實驗方法與判定：

1.對照品溶液的穩(wěn)定性

2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱；柱溫120℃；進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應不低于10000。

4.實驗方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗證對照品溶液在使用期內穩(wěn)定可靠。

酯封端左旋聚乳(重均分子量137-170萬) Nordihydrocapsaicin抑瘤M抗體包裝5g

酯封端左旋聚乳(重均分子量17-26萬) 4-(Methylamino)-antipyrine抑瘤M受體抗體包裝25g

酯封端左旋聚乳(重均分子量170-206萬) Hydrazine sulfate鋅指蛋白339抗體包裝5g

酯封端左旋聚乳(重均分子量206-288萬) Hydrazine sulfate氧氣調節(jié)蛋白150抗體包裝1g

酯封端左旋聚乳(重均分子量26-36萬) Cyclandelate氧化應激反應蛋白1抗體包裝1g

酯封端左旋聚乳(重均分子量3-5.5萬) Nitrilotriacetic acid固生蛋白M抗體包裝5g

酯封端左旋聚乳(重均分子量36-48萬) 1,3- Propylene Glycol末端多聚腺苷1蛋白抗體包裝1g

酯封端左旋聚乳(重均分子量48-73萬) Diethylene Glycol嗅球蛋白3抗體包裝5g

酯封端左旋聚乳(重均分子量5.5-9 萬) Chlorothiazide轉錄因子OTX1抗體包裝1g

酯封端左旋聚乳(重均分子量73-102萬) 4-amino-6-chloro-1,3-benzenedisulfonamide轉錄因子OTX2抗體包裝1g

酯封端左旋聚乳(重均分子量9-17萬) Alkene轉錄因子OTX1+OTX2抗體包裝250mg

(3R,4R)-N,4-二基-1-(基)-3-... N-Methylparoxetine增食欲B/欲激B包裝5g

(R)-1-基-3-基丁基蒎烷二酯鹽鹽 Sevoflurane鳥脫羧抗體包裝100mg

1,2-二基-5-羥基-3-乙酯;比酯; DiaveridineO位N-乙酰葡萄糖OGT抗體包裝25mg

1,9-吡唑并蒽;SP600125 Mestanolone少突膠質轉錄因子1包裝25g

孔雀綠指示劑Fc GammaR I /CD64(Human Receptor I for the Fc region of immunoglobulin G,Fc GammaR I ) ELISA Kit  G Fc段受體Ⅰ規(guī)格： 48T

GCP-2/CXCL6(Human granulocyte chemotactic protein-2,GCP-2) ELISA Kit  人粒細胞趨化蛋白-2規(guī)格： 48T

IFN- Omega (Human Interferon Omega ,IFN- Omega ) ELISA Kit  人ω干擾su規(guī)格： 48T

GlyCAM-1(Human glycosylation-dependent cell adhesion molecule-1) ELISA Kit  人糖基化依賴的細胞黏附分子規(guī)格： 48T

IRF(Human interferon Regulatory Factor) ELISA Kit  人干擾su調節(jié)因子規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現(xiàn)，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉染細胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉染細胞的篩選

1）  轉染48h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，將細胞稀釋至豐度不超過25%

2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評估細胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉染，以及篩選效果。

4）  挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）  之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。