詳細介紹
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
產(chǎn)品名稱 | CUL4B蛋白抗體 |
英文名稱 | Cullin 4B |
規(guī)格 | 0.1ml |
?
公司專業(yè)供應(yīng)的抗體,抗體是用于化學(xué)反應(yīng)、分析化驗、研究實驗、教學(xué)實驗、化學(xué)配方使用的純凈化學(xué)品,產(chǎn)品品質(zhì),價格實惠,多種規(guī)格供應(yīng),售后完善??贵w的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標(biāo)記技術(shù):
(一)原理
當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應(yīng)的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準(zhǔn)備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
小鼠T細胞活化連接蛋白(LAT)哈茨木霉拉丁屬名: Trichoderma harzianum
小鼠抗子宮內(nèi)膜抗體(EMAb)杜鵑尾孢菌注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
小鼠低密度脂蛋白免疫復(fù)合物(LDL-IC)施氏假單胞菌拉丁屬名: Pseudomonas stuzeri
小鼠解脲脲原體抗體(UU-Ab) 釀酒酵母拉丁屬名: Saccharomyces cerevisiae
小鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)雞痘病毒注意事項: 僅用于科學(xué)研究或者工業(yè)應(yīng)用等非醫(yī)療目的,不可用于類或動物的臨床診斷或治療,非藥用,非食用
小鼠抗中性粒細胞核周抗體(pANCA)食品安全快速檢測箱 精簡配置規(guī)格: 套
小鼠脂酰肌抗體IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)鮑曼不動桿菌拉丁屬名: Acinetobacter baumnnii
小鼠15脂加氧酶(15-LO/LOX)細疣籃狀菌拉丁屬名: Talaromyces verruculosus
小鼠β干擾素(IFN-β/IFNB) 粘孢白僵菌用途: 害蟲生物防治
小鼠肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)尖孢鐮孢拉丁屬名: Fusarium oxysporum
小鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)可可里亞鎮(zhèn)小鏈孢菌拉丁屬名: Calatospora chokoriensis
小鼠抗中性粒/中心體抗體(ACA) 火紅色紅曲菌拉丁屬名: Monascus rutilus
小鼠結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白(Hpt/HP)Marisediminicola拉丁屬名: Marisediminicola antarctica
小鼠16α羥基雌酮1(16-α OHE-1)裂褶菌拉丁屬名: Schizophyllum commune
小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)短桿狀馬賽菌拉丁屬名: Massilia brevitalea
小鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成酶3(eNOS-3)西奈青霉拉丁屬名: Penicillium sinaicum
CUL4B蛋白抗體生長因子受體結(jié)合蛋白2抗體1-Dehydroxybaccatin IV中文名:別名:分子式:C32H44O13
骨形態(tài)形成蛋白拮抗蛋白抗體Taxachitriene A中文名:別名:Taxumairol M分子式:C32H44O13
G蛋白偶聯(lián)受體GPR158蛋白抗體Decinnamoyltaxinine J中文名:別名:分子式:C30H42O11
G蛋白激活內(nèi)流鉀通道蛋白2抗體Taxezopidine G中文名:別名:分子式:C35H44O9
G蛋白偶聯(lián)受體GPR78蛋白抗體Nagilactone B中文名:別名:分子式:C19H24O7