產(chǎn)品分類(lèi):染色其他
儲(chǔ)存條件:室溫,12個(gè)月
用途:生物染色
注意事項(xiàng):主要由結(jié)晶紫和無(wú)水甲醇組成,稀釋20倍后使用。
公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn),咨詢(xún)并訂購(gòu)!
產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
結(jié)晶紫甲醇溶液 | 100ml | FS-R7154 |
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱(chēng)量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來(lái)水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱(chēng)量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱(chēng)取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線(xiàn),搖勻。
實(shí)驗(yàn)方法與判定:
1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性
2.對(duì)照品溶液的配制:精密量取腦對(duì)照品適量,加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱;柱溫120℃;進(jìn)樣口溫度250℃;檢測(cè)器溫度250℃;分流進(jìn)樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。
4.實(shí)驗(yàn)方法:配制的對(duì)照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液,三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái),保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%,驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型,培養(yǎng)基,生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線(xiàn)(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線(xiàn),來(lái)確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線(xiàn)的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,可通過(guò)建立殺滅曲線(xiàn)(劑量反應(yīng)曲線(xiàn))來(lái)實(shí)現(xiàn),至少選擇5個(gè)濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過(guò)夜;注:對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4) 接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密,其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀(guān)察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,這取決于宿主細(xì)胞類(lèi)型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
根瘤菌膜蛋白Derlin抗體Human NFAT5(Nuclear factor of activated T-cells 5) ELISA Kit人Na+/H+交換體3(NHE3)免疫試劑盒
藤黃微球菌二脂酰甘油?;D(zhuǎn)移抗體Human PAPD4 (Poly(A) RNA polymerase GLD2) ELISA KIT人N1,N12-二乙?;?免疫試劑盒
秦氏蜜環(huán)菌轉(zhuǎn)錄因子DP1抗體Human NOD1 (Nucleotide-binding oligomerization domain-containing protein 1) ELISA KIT人N(ε)羧乙基賴(lài)(CEL)免疫試劑盒
*灰葡萄孢菌間粘附分子整合蛋白3抗體Human ODC1(Ornithine decarboxylase) ELISA Kit人N -甲基- D -天冬抗體IgG(NMDA Antibody IgG)免疫試劑盒
杰氏假單胞菌DNA依賴(lài)性蛋白激抗體Human OLIG1 (Oligodendrocyte transcription factor 1) ELISA KIT人MYC誘導(dǎo)核抗原(MINA)免疫試劑盒
霍亂弧菌磷化DNA依賴(lài)性蛋白激抗體Human OPHN1 (Oligophrenin-1) ELISA KIT人MAX二聚化蛋白1(MXD1)免疫試劑盒
須殼孢磷化DNA依賴(lài)性蛋白激抗體Human OPALIN (Opalin) ELISA KIT人MAP磷雙特異性磷1(DUSP-1)免疫試劑盒
斑玉蕈蓬亂蛋白2抗體Human OBFC1 (CST complex subunit STN1) ELISA KIT人L選擇(L-Selectin/CD62L)免疫試劑盒
文昌野野村氏菌防御α5抗體Human OCM(Oncomodulin-1) ELISA Kit人L-腎上腺免疫試劑盒
粉狀畢氏酵母鋅離子結(jié)合蛋白DTX2抗體Human NRARP (Notch-regulated ankyrin repeat-containing protein) ELISA KIT人L-乳脫氫(L-LDH)免疫試劑盒
NCI-H647(人肺癌)(通過(guò)STR鑒定)EYA3蛋白抗體Human OLIG1 (Oligodendrocyte transcription factor 1) ELISA KIT人L-基氧化(LAO)免疫試劑盒
乳桿菌屬痛感蛋白抗體Human OPALIN (Opalin) ELISA KIT人Klotho 免疫試劑盒
短波單胞菌屬翻譯延伸因子EF-1 α2抗體Human NHEJ1 (Non-homologous end-joining factor 1) ELISA KIT人KI-67抗原(Ki-67)免疫試劑盒
硫色曲霉延伸因子EF-1δ抗體Human NRP2 (Neuropilin-2) ELISA KIT人Jo1抗體/抗組酰tRNA合成抗體(Jo1/HRS)免疫試劑盒
解脂假絲酵母解脂變種延伸因子EF-1 γ抗體Human OBFC1 (CST complex subunit STN1) ELISA KIT人IV形膠原蛋白α3鏈(COL4A3)免疫試劑盒
雞腿菇磷化真核翻譯延長(zhǎng)因子2抗體Human NSMAF (Protein FAN) ELISA KIT人Igγ3鏈C區(qū)(IGHG3)免疫試劑盒
小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格:500mg/L,溶劑:1%鹽
中間根瘤菌Mesorhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:1000μg/mL,溶劑:沒(méi)食子乙酯
恩氏菌Rahnella│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品黃芪黃
結(jié)晶紫甲醇溶液EL(Human EuglobulinLysis) ELISA Kit 人優(yōu)球蛋白規(guī)格: 48T
f-Hb(Human free haemoglobin) ELISA Kit 人游離血紅蛋白規(guī)格: 48T
PRM1(Human Protamine 1) ELISA Kit 人1規(guī)格: 48T
HbCO(Human carboxyhemoglobin) ELISA Kit 人一氧化碳血紅蛋白規(guī)格: 48T
PAIg(Human platelet-associated immunoglobulins) ELISA Kit 人血小板相關(guān)免疫球蛋白規(guī)格: 48T