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產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
苔蘚保存液 | 100ml | FS-R7112 |
產(chǎn)品分類:植物染色
儲(chǔ)存條件:室溫,避光,12個(gè)月
用途:用于液體浸制苔蘚標(biāo)本的制作。
注意事項(xiàng):主要由福爾馬林等組成。如需保色需用硫酸銅浸泡后再用此液長(zhǎng)期保存。
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來(lái)水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線,搖勻。
實(shí)驗(yàn)方法與判定:
1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性
2.對(duì)照品溶液的配制:精密量取腦對(duì)照品適量,加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱;柱溫120℃;進(jìn)樣口溫度250℃;檢測(cè)器溫度250℃;分流進(jìn)樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。
4.實(shí)驗(yàn)方法:配制的對(duì)照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液,三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái),保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%,驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
金白F4(金針菇)胰羧肽A6抗體Human 12-LO(Arachidonate 12-Lipoxygenase) ELISA Kit人骨形成蛋白4(BMP4)免疫試劑盒
澳型核果褐腐病菌9號(hào)染色體開放閱讀框150抗體Human TOR2A(Prosalusin) ELISA Kit人骨涎蛋白(BSP)免疫試劑盒
季也蒙邁耶氏酵母鈣粘附蛋白9抗體Human VHL(Von Hippel-Lindau disease tumor suppressor) ELISA Kit人骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)免疫試劑盒
嗜熱脂肪芽胞桿菌鈣粘蛋白15抗體Human MASP1(Mannan-binding lectin serine protease 1) ELISA Kit人骨特異性堿性磷B(ALP-B)免疫試劑盒
釀酒酵母分子伴侶復(fù)合體TCP-1β抗體Human IDE(Insulin-degrading enzyme) ELISA Kit人骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)免疫試劑盒
木豆根瘤菌分裂周期蛋白25C抗體Human LSS(Lanosterol synthase) ELISA Kit人骨橋(OPN)免疫試劑盒
毛瓣雞血藤根瘤菌過(guò)敏C4/補(bǔ)體C4抗體Human ECM1(Extracellular matrix protein 1) ELISA Kit人骨膜蛋白/成骨特異性因子2(POSTN)免疫試劑盒
鞘菌屬脂肪結(jié)合蛋白3抗體Human IFI16(Gamma-interferon-inducible protein 16) ELISA Kit人骨膠原交聯(lián)(Cr)免疫試劑盒
腐皮鐮孢16號(hào)染色體開放閱讀框48抗體Human APLN36(Apelin-36) ELISA Kit人骨堿性磷(BALP)免疫試劑盒
平菇色P450 19抗體Human MT2A(Metallothionein-2) ELISA Kit人骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)免疫試劑盒
黃色金黃桿菌CD28抗體Human NRG-1(Neuregulin 1) ELISA Kit人骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)免疫試劑盒
長(zhǎng)根小德蘑1號(hào)染色體開放閱讀框195抗體Human TUBB(Tubulin beta chain) ELISA Kit人骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)免疫試劑盒
亞膜畢赤酵母NK抑制性受體2DL1抗體Human MUCL1(Mucin-like protein 1) ELISA Kit人骨成型蛋白7(BMP-7)免疫試劑盒
繩狀籃狀菌3號(hào)染色體開放閱讀框67抗體Human CD3E(T-cell surface glycoprotein CD3 epsilon chain) ELISA Kit人骨成型蛋白2(BMP-2)免疫試劑盒
生根根瘤菌κ-酪蛋白抗體Human ERCC1(DNA excision repair protein ERCC-1) ELISA Kit人骨成型蛋白15(BMP-15/GDF-9B)免疫試劑盒
孢吸水鏈霉菌北京變種唾液結(jié)合性免疫球蛋白樣凝集7抗體Human NRP1(Neuropilin-1) ELISA Kit人骨保護(hù)(OPG)免疫試劑盒
根瘤菌Rhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:0.96廣藿香
鐮孢屬Fusarium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品山麥冬皂苷B
產(chǎn)硫芽孢桿菌Bacillus│thioparans 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品乙酰車前草酯
苔蘚保存液Ntn1(Human Netrin-1) ELISA Kit 人軸突生長(zhǎng)誘向因子1規(guī)格: 48T
REG-4(Human regenerating gene IV ) ELISA Kit 人再生基因蛋白IV規(guī)格: 48T
VS(Human versican/PG-M/PG-350) ELISA kit 人多功能蛋白聚糖規(guī)格: 48T
Nfkbie(Human nuclear factor of kappa light polypeptide gene enhancer in B-cells inhibitor epsilon) KLISA Kit 人B細(xì)胞κ 輕肽基因增強(qiáng)子核因子抑制因子ε規(guī)格: 48T
ADAMTS4(Human ADAM metallopeptidase with thrombospondin type 1 motif4) ELISA Kit 人ADAM金屬肽mei含血小板反應(yīng)蛋白1基元4規(guī)格: 48T
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型,培養(yǎng)基,生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來(lái)確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,可通過(guò)建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來(lái)實(shí)現(xiàn),至少選擇5個(gè)濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過(guò)夜;注:對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細(xì)胞類型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4) 接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密,其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,這取決于宿主細(xì)胞類型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。