詳細(xì)介紹
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進(jìn)行動物免疫實驗。
4、試取血樣進(jìn)行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
公司專業(yè)供應(yīng)的抗體,抗體是用于化學(xué)反應(yīng)、分析化驗、研究實驗、教學(xué)實驗、化學(xué)配方使用的純凈化學(xué)品,產(chǎn)品品質(zhì),價格實惠,多種規(guī)格供應(yīng),售后完善。
產(chǎn)品名稱 | 溴區(qū)結(jié)構(gòu)域相鄰鋅指蛋白1A抗體 |
英文名稱 | ACF1 |
規(guī)格 | 0.2ml |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強(qiáng),純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進(jìn)行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析,具有高效,特異性強(qiáng),純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標(biāo)記技術(shù):
(一)原理
當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(NaI)遇強(qiáng)氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進(jìn)行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強(qiáng)揮發(fā)性的有機(jī)溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準(zhǔn)備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進(jìn)行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進(jìn)行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
載脂蛋白B100apo-B100英文名稱:Rabbit apoprotein B100, apo-B100
轉(zhuǎn)化生長因子β2TGFβ2英文名稱:Rabbit transforming growth factorβ2, TGFβ2
一氧化氮合成酶NOS英文名稱:Rabbit nitric oxide synthase, NOS
內(nèi)皮型一氧化氮合成酶eNOS英文名稱:Rabbit Endothelial nitric oxide synthase, eNOS
尿激酶型纖溶酶原激活物uPA英文名稱:Rabbit urokinase plasminogen activator, uPA
超敏C反應(yīng)蛋白hs-CRP英文名稱:Rabbit high sensitivity C-Reactive Protein, hs-CRP
基質(zhì)金屬蛋白酶1MMP-1英文名稱:Rabbit matrix metalloproteinase 1, MMP-1
血小板因子4PF-4/CXCL4英文名稱:Rabbit Platelet Factor 4, PF-4
中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶NE英文名稱:Rabbit neutrophil elastase, NE
補(bǔ)體片斷3aC3a英文名稱:Rabbit Complement fragment 3a, C3a
基質(zhì)金屬蛋白酶3MMP-3英文名稱:Rabbit matrix metalloproteinase 3, MMP-3
可溶性CD40配體sCD40L英文名稱:differentiation 40 ligand, sCD40L
高遷移率族蛋白B1HMGB-1英文名稱:Rabbit High mobility group protein B1, HMGB-1
B細(xì)胞淋巴瘤因子2Bcl-2英文名稱:Rabbit B-cell leukemia/lymphoma 2, Bcl-2
色素上皮衍生因子PEDF英文名稱:Rabbit pigment epithelium-derived factor, PEDF
溴區(qū)結(jié)構(gòu)域相鄰鋅指蛋白1A抗體Brevibacterium sp.分離基物: 水樣/紅海鹵水提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 微生物/耐鹽菌(可耐受鹽濃度為96‰)培養(yǎng)基: 821生長條件: 22℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Streptomyces sp.分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 產(chǎn)生抗腫瘤活性物質(zhì)培養(yǎng)基: CM0012生長條件: 28C存儲條件: 真空冷凍干燥
粘質(zhì)沙雷氏菌種屬: Serratia marcescens提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 致病菌檢測芯片培養(yǎng)基: 2生長條件: 35℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
Brevibacterium ammoniagenes提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 產(chǎn)賴氨酸。培養(yǎng)基: CM0002生長條件: 30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
Candida utilis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0013生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Acetobacter aceti分離基物: 醋提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 用于發(fā)酵醋酸培養(yǎng)基: 1生長條件: 30℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Enterococcus faecalis提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 研究培養(yǎng)基: CM0002生長條件: 30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法;定期移植法
Aspergillus oryzae分離基物: 小麥提供形式: 斜面培養(yǎng)物;凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 用于儲糧微生物研究培養(yǎng)基: 17生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Aspergillus awamori提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 以廢糖蜜為原料發(fā)酵檸檬酸。培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28-30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法