血管生成素相關(guān)蛋白6抗體

抗體的制備過程：
1. 免疫原：普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原；小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物：常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集：一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定：得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存：抗體一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價，而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。

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1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進(jìn)行保存?？贵w一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價，而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標(biāo)記技術(shù)：
（一）原理
當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(NaI)遇強(qiáng)氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團(tuán)進(jìn)行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進(jìn)行鹵化反應(yīng)的基團(tuán)主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進(jìn)行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強(qiáng)揮發(fā)性的有機(jī)溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
（二）準(zhǔn)備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體；0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5；無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液；100g/L三醋酸；70%乙醇；新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5）；胺T反應(yīng)終止緩沖液；
2.儀器
凝膠過濾柱；￥-記數(shù)器；玻璃纖維濾。
（三）操作要點
1.用胺T法進(jìn)行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進(jìn)行；
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì)，可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m，并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml；
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年；
4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天）；
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低；
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
抗體制備過程：
1.材料與試劑
  a．提取的動物 Ig
  b．弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
  c．青霉素和鏈霉素
  d．實驗動物 兔
  e．其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進(jìn)行動物免疫實驗。
4、試取血樣進(jìn)行測試，查看免疫效果。
5、如果免疫成功，殺死實驗活體，采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清（無菌采制）
腸病毒Enterovirus英文名稱：Human Enterovirus

百日咳毒素PT英文名稱：Human Pertussiu Toxin, PT

白色念珠菌C.albicans英文名稱：Human Candida Albicans, C.albicans

流行性乙型腦炎抗體IgGJE IgG英文名稱：Human Coronaviruses IgG

不耐熱腸毒素B亞單位LTB英文名稱：Human heat-labile enterotoxin B subunit, LTB

沙眼衣原體抗體CT英文名稱：Human Chlamydia trachomatis, CT

血吸蟲schistosoma英文名稱：human schistosoma

輪狀病毒抗原RV Ag英文名稱：Human Rotavirus antigen, RV Ag

軍團(tuán)菌抗原LP Ag英文名稱：Human Legionella pneumophila antigen, LP Ag

大腸菌素colicin英文名稱：human colicin

腺病毒抗原ADV-Ag英文名稱：Human Adenovirus Antigen, ADV-Ag

破傷風(fēng)抗體Tetanus Ab英文名稱：Human Tetanus Antibody

鉤端螺旋體IgMLebtospira英文名稱：Human Lebtospira IgM

鉤端螺旋體IgGLep IgG英文名稱：Human Leptospira IgG, Lep IgG

阿米巴Amebiasis英文名稱：Human Amebiasis
血管生成素相關(guān)蛋白6抗體Bacillus amyloliquefaciens分離基物: LB培養(yǎng)基提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 可以作為研究抑真菌作用相關(guān)基因的工程菌培養(yǎng)基: 33生長條件: 30℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法

恥垢分枝桿菌種屬: Mycobacterium Mycobacterium smegmatis提供形式: 凍干物安全等級: 3模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 研究生長條件: 37存儲條件: 真空冷凍干燥法

Rhizopus stolonifer var. stolonifer提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 22℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Thermoanaerobacter ethanlicus分離基物: 高溫溫泉提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 纖維素高溫厭氧降解培養(yǎng)基: 0491生長條件: 65℃存儲條件: 定期移植法

Candida tropicalis分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0013生長條件: 25℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Streptomyces intermedius分離基物: 沉積物/表層沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 生物活性微生物：抗菌活性譜:金黃色葡萄球菌 -- 枯草芽孢桿菌 -- 大腸埃希氏菌 -- 熒光假單胞菌 -- 白假絲酵母 20 宛氏擬青霉 25培養(yǎng)基: 1002生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

Antrodia wangii Y.C. Dai & H.S. Yuan分離基物: 子實體提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 25存儲條件: 定期移植法

Myrothecium verrucaria提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25-28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

Bacillus thuringiensis subsp. ostriniae提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 33生長條件: 37℃存儲條件: 定期移植法