詳細介紹
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
公司專業(yè)供應(yīng)的抗體,抗體是用于化學反應(yīng)、分析化驗、研究實驗、教學實驗、化學配方使用的純凈化學品,產(chǎn)品品質(zhì),價格實惠,多種規(guī)格供應(yīng),售后完善。
產(chǎn)品名稱 | 醛固酮類還原酶家族7成員A2抗體 |
英文名稱 | AKR7A2 |
規(guī)格 | 0.2ml |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標記技術(shù):
(一)原理
當應(yīng)用化學氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應(yīng)的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
前列腺素F2αPGF2α英文名稱:Human Prostaglandin F2α, PGF2α
總前列腺特異抗原tPSA英文名稱:Human total prostate s pecific antigen, tPSA
類免疫缺陷病毒抗體HIV英文名稱:Human anti-immunodeficiency virus antibody, HIV
解脲脲原體抗體UU-Ab英文名稱:Human Ureaplasma urealyticum antibody, UU-Ab
復(fù)合前列腺特異性抗原CPSA英文名稱:Human complex edprostate specific antigen, cPSA
單純皰疹病毒Ⅱ型抗體HSVⅡ-Ab英文名稱:Human Herpes simplexvirus Ⅱ antibody, HSVⅡ-Ab
細菌性陰道病BV英文名稱:Human bacterial vaginosis, BV
單純皰疹病毒Ⅰ型抗體HSVⅠAb英文名稱:Human Herpes simplexvirusⅠantibody, HSVⅠAb
乳頭狀瘤病毒抗體IgMHPV-IgM英文名稱:Human papillomavirus IgM, HPV-IgM
乳頭狀瘤病毒抗體IgGHPV-IgG英文名稱:human papillomavirus IgG, HPV-IgG
單純皰疹病毒抗原2HSV-Ag2英文名稱:Human Herpes simplex virus 2, HSV-Ag2
游離前列腺特異性抗原fPSA英文名稱:Human Free Prostate Specific Antigen, fPSA
前列腺特異性抗原PSA英文名稱:Human prostate specific antigen, PSA
磷脂酰絲氨酸PS英文名稱:Human phosphatidylserine, PS
膽堿磷酸甘油酯PC/CPG英文名稱:Human choline phosphoglyceride, PC/CPG
醛固酮類還原酶家族7成員A2抗體Fusarium oxysporum提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25-28℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Pichia guilliermondii分離基物: 梨提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 用于果酒發(fā)酵研究培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
Streptococcus bovis分離基物: 水牛提供形式: 凍結(jié)物安全等級: 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 用于研究教學培養(yǎng)基: 396生長條件: 37
Bacillus thuringiensis分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 266生長條件: 28-30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
Halosarcina pallida分離基物: 鹽田水苔提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 菌紅素產(chǎn)生菌培養(yǎng)基: 952生長條件: 37℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
金霉素鏈霉菌種屬: Streptomyces aureofaciens提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: yes應(yīng)用領(lǐng)域: Produces aureomycin (U.S. Pat. 2,482,055), chlortetracycline, tetracycline (U.S. Pat. 3,053,740).培養(yǎng)基: 0455生長條件: 30℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;礦物油法;定期移植法
Penicillium aurantiogrise提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: CM0014生長條件: 25℃存儲條件: 真空冷凍干燥法
Penicillium sp.分離基物: 貝類提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 可做抑真菌、抑腫瘤研究。培養(yǎng)基: 475生長條件: 20℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法
Pleurotus nebrodensis提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 遺傳性研究培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25℃