RNase A

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產(chǎn)品分類：RNA溶液

儲存條件：—20℃,12個月

用途：去除RNA

注意事項：主要由RNase A、Tris-HCL、氯化鈉組成,未加熱滅活,含有極少量DNase。

 

 

配制與標(biāo)定的實驗原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實驗方法與判定：

1.對照品溶液的穩(wěn)定性

2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應(yīng)不低于10000。

4.實驗方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

溶血不動桿菌基因型4神經(jīng)元2抗體Human GH(Growth Hormone) ELISA Kit骨織(Ostn)

灰腐質(zhì)霉抑癌基因NDRG3抗體Human GM-CSF(Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor) ELISA Kit骨粘連蛋白(ON)

地霉半乳糖酵母有絲分裂氧化1抗體Human GDNF(Glial cell line-derived neurotrophic factor) ELISA Kit骨形成蛋白7(BMP7)

德氏乳桿菌保加亞亞種NADPH oxidase 3抗體Human IGF-2(Insulin-like growth factor II) ELISA Kit骨形成蛋白6(BMP-6)

明蘇達(dá)被毛孢NADPH氧化NOX家族的成員4抗體Human GH(Growth Hormone) ELISA Kit骨形成蛋白4(BMP4)

Novosphingobium panipatense分裂周期相關(guān)蛋白1抗體Human Gp130/IL6ST(Interleukin-6 receptor subunit beta) ELISA Kit骨形成蛋白15(BMP15)

雜色曲霉NFAM1抗體Human GM-CSF(Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor) ELISA Kit骨形成蛋白(BMPs)

釀酒酵母環(huán)指蛋白67抗體Human GNLY(Granulysin) ELISA Kit骨涎蛋白(BSP)

中國毛霉神經(jīng)母瘤抑瘤蛋白1抗體Human IL-18R1/IL-18R(Interleukin-18 receptor 1) ELISA Kit骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)

大腸埃希氏菌嗜中性粒胞漿因子1抗體Human IL-3(Interleukin 3) ELISA Kit骨特異性堿性磷B(ALP-B)

微黃八疊球菌線粒體復(fù)合物NDUFS3蛋白抗體Human IL-29(Interleukin 29) ELISA Kit骨髓抑制因子1(MPIF-1/CCL23)

韓國生孢八疊球菌雄激受體復(fù)合物相關(guān)蛋白/核受體相互作用蛋白抗體Human GzmB(Granzyme B) ELISA Kit骨橋(OPN)

貪噬菌屬9號染色體開放閱讀框156抗體Human HBEGF(Proheparin-binding EGF-like growth factor) ELISA Kit骨膜蛋白/成骨特異性因子2(POSTN)

紅球菌核因子活化T胞漿蛋白3抗體Human HGF(Hepatocyte Growth Factor) ELISA Kit骨膠原交聯(lián)(Cr)

季也蒙畢赤酵母干轉(zhuǎn)錄因子NANOGP8抗體Human IL-28A(Interleukin-28A) ELISA Kit骨堿性磷(BALP)

棲泥鹽鹽八疊球菌神經(jīng)凋亡抑制蛋白抗體Human IL-33(Interleukin-33) ELISA Kit骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)

米曲霉Aspergillus│oryzae 質(zhì)量規(guī)格：進(jìn)分，Sigma74782,蛋白小于1%遠(yuǎn)志

ATCC9058=CBS2021=IFO0566=CCRC20862=NRRLY-488資源名稱: 季也蒙畢赤酵母 質(zhì)量規(guī)格：進(jìn)分，Sigma31149,蛋白小于5%異歐前胡

皮落青霉Penicillium│crustosum 質(zhì)量規(guī)格：98%,進(jìn)分歐前胡
RNase APROG(Mouse Progesterone)ELISA Kit  小鼠孕激su/孕tong規(guī)格： 48T

sRANKL(Mouse soluble receptor activator of nuclear factor-kB ligand)ELISA Kit  小鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基規(guī)格： 48T

CT(Mouse Calcitonin)ELISA Kit  小鼠降鈣su規(guī)格： 48T

ET-1(Mouse Endothelin 1)ELISA Kit  小鼠內(nèi)皮su1規(guī)格： 48T

E2(Mouse Estradiol)ELISA Kit  小鼠雌二chun規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實現(xiàn)，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。