商品屬性:
商品介紹:
測(cè)定意義: S-CAT是土壤微生物代謝的重要酶類,在H2O2清除系統(tǒng)中具有重要作用。測(cè)定原理:H2O2在240nm下有特征吸收峰,通過(guò)測(cè)定與土壤反應(yīng)后溶液在此波長(zhǎng)下吸光度的變化,即可反應(yīng)S-CAT活性的高低。需自備的儀器和用品:紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水 |
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取:按照血清(漿)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:按照血清(漿)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
依諾肝鈉英文名: Tin (II) oxalate蛋白酪磷H1抗體包裝25g
依曲替酯;阿維酯英文名: Tin (IV) oxide磷化磷脂酰肌激催化亞單位D抗體包裝5g
依曲韋林英文名: Titanium (III) sulfate磷化周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體包裝1g
依替膦鈉英文名: Titanium (IV) sulfate穿孔抗體包裝250mg
*度英文名: Tributyl citratePALM3抗體包裝100g
咪酯英文名: Tris(bathophenanthrolinedisulfonate)ruthenium(II) sodium salt solution芳香酯1(對(duì)氧磷)抗體包裝25g
乙嘧啶英文名: Trypsinogen >2500U/mg from bovine pancreas磷吡哆氧化抗體包裝100g
乙昔羅鈉英文名: Tryptamine磷化蛋白激C抗體包裝25g
異特英文名: Tungsten (VI) oxide磷化蛋白激C抗體包裝500g
吲達(dá)帕英文名: Tungsten carbide-200磷化腫瘤抑制基因PTEN抗體包裝1g
辛英文名: Tungsten powder磷化磷脂酰肌激催化亞單位A抗體包裝250mg
右旋蘭索唑英文名: Tungstic (VI) acid磷化磷脂酰肌激抗體包裝100g
右旋洛芬英文名: Verruculogen from Penicillium verruculosum磷化磷脂酰肌激抗體包裝25g
右旋洛芬丁三英文名: Wool fat磷化蛋白激C抗體包裝5g
右佐匹克英文名: X-GLUC, sodium salt磷化蛋白激C抗體包裝25g
熒光假單胞菌Pseudomonas│fluorescens 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品胱天蛋白3試劑盒黃芪苷(黃芪皂苷IV)-對(duì)照品;有報(bào)告
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品胱天蛋白12試劑盒(內(nèi)酯)-對(duì)照品;有報(bào)
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品胱天蛋白10試劑盒野百合堿(豬屎豆堿)-對(duì)照品;有報(bào)告
土壤過(guò)氧化氫酶(SCAT)測(cè)試盒50管/24樣枯草芽胞桿 3-氨基-4-氟甲酯ERp57Elisa
枯草芽孢桿 2-氟脂褐Elisa
大孢鏈霉 5-降烯-2,3-二羧酸一甲酯心型脂肪酸結(jié)合蛋白Elisa
近弧狀短波單胞 鉛(II)BPDE-DNA加合物Elisa
根瘤 1--3-乙氧基烷周期依賴性激2Elisa
秦氏蜜環(huán) 順-4-氨基環(huán)己烷甲酸可溶性β淀粉樣蛋白Elisa
鏈球?qū)?/span> 4-氨基-3-溴喹啉不可溶性β淀粉樣蛋白Elisa
艱難鏈霉 3-氧代-3,4-二氫-2-喹喔啉甲酸乙酯雷帕霉靶蛋白Elisa
紅球 4-氨基鄰苯二甲酰亞單氧化BElisa
大腸埃希 4-氟-1,2-苯二腸道病71型IgG抗體Elisa
唐菖蒲伯克霍爾德氏 6--1,2,3,4-四氫咔唑蛋白酪磷酸抗體Elisa
尾孢屬 2--3,5-二氟苯甘油磷酸Elisa
釀酒酵母 3-氨基-5-甲基己酸過(guò)氧化氫Elisa
小鏈霉(小諾氏) N-(2,3,4-三氟苯)乙酰苯抗雙鏈DNA-IgG抗體Elisa
總狀橫梗霉 陽(yáng)離子桃紅FG抗雙鏈DNA-IgM抗體Elisa