胰蛋白酶-EDTA溶液

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兔腺苷三磷酸結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體G1(ABCG1)試劑

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產(chǎn)品分類：細(xì)胞培養(yǎng)

儲(chǔ)存條件  —20℃,12個(gè)月

用途  又稱培養(yǎng)細(xì)胞消化液,用于培養(yǎng)細(xì)胞的消化,或者一些組織的消化。

注意事項(xiàng)  無(wú)菌溶液,經(jīng)過(guò)濾除菌處理。主要由胰酶或胰蛋白酶、EDTA組成,含酚紅。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

蛋白聚糖4(PRG4)PRG4 ELISA Kit磷化自噬相關(guān)蛋白3抗體包裝5g

蛋白激B(PKB)PKB ELISA Kit縮2抗體包裝1g

蛋白激A(PKA)PKA ELISA Kit胰腺α淀粉抗體包裝25g

蛋白C(Protein C)Protein C ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白11抗體包裝5g

膽囊收縮/腸促胰肽(CCK)CCK ELISA Kit磷化受體酪激c-Abl抗體包裝100mg

膽囊收縮(CCK)CCK ELISA Kit磷化活化復(fù)制因子2抗體包裝100mg

乙酰轉(zhuǎn)移(ChAT)ChAT ELISA Kit固還原家族1成員D1抗體包裝25g

磷甘油酯(PC/CPG)PC/CPG ELISA Kit肝血管生成相關(guān)蛋白抗體包裝5g

膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)CETP ELISA Kit自解結(jié)構(gòu)域5蛋白抗體包裝25g

膽固(CH)CH ELISA Kit?；蝓?包裝5g

單核細(xì)胞趨化蛋白5(MCP-5)MCP-5 ELISA Kit溶血磷脂酰基轉(zhuǎn)移β抗體包裝25g

單核細(xì)胞趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)MCP-4/CCL13 ELISA KitAFP4b蛋白抗體包裝5g

單核細(xì)胞趨化蛋白3(MCP-3/CCL7)MCP-3/CCL7 ELISA Kit載脂蛋白C2抗體包裝100g

單核細(xì)胞趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)MCP-2/CCL8 ELISA Kit載脂蛋白A5抗體包裝25g

單核細(xì)胞趨化蛋白1(MCP-1)MCP-1 ELISA Kit載脂蛋白A2抗體包裝5g

凋亡蛋白活性因子-1抗體（N端）結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)CGK733 是一種有效的 ATM/ATR 抑制劑，用于癌癥研究。
胰蛋白酶-EDTA溶液Cyr61/FITC  熒光標(biāo)記富半胱氨肝結(jié)合蛋白61IgG聚二單 平均分子量500

Cytochrome C/FITC  熒光標(biāo)記色 CIgG1-壬烯 90%

Cytochrome P450 2C19/CYP2C19 /FITC  熒光標(biāo)記色P450 2C19IgG萘 閃爍純，99%

Cytochrome P450 2C9/CYP2C9 /FITC  熒光標(biāo)記色P450 2C9IgG萘 AR

Cytochrome P450 2D6/CYP2D6 /FITC  熒光標(biāo)記色P450 2D6IgG正辛烷 96%

CK1/8/19(Cytokeratin 1/8/19)/FITC  熒光標(biāo)記角蛋白1/8/19IgG正辛烷 CP,95%

DRD1 receptor/FITC  熒光標(biāo)記多巴受體-D1IgG1-辛硫 98%

DRD2 receptor/FITC  熒光標(biāo)記多巴受體-D2IgG1-辛烯 98%

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。