Tris-EDTA緩沖液

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A

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點，咨詢并訂購！

產(chǎn)品分類：DNA溶液

儲存條件：室溫,12個月

用途：pH緩沖液,可以結(jié)合金屬離子

注意事項：無菌溶液。主要由10mM Tris、0.1mM EDTA組成,經(jīng)高壓滅菌處理。

 

 

配制與標(biāo)定的實驗原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實驗方法與判定：

1.對照品溶液的穩(wěn)定性

2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱；柱溫120℃；進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應(yīng)不低于10000。

4.實驗方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

側(cè)孢短芽孢桿菌鈣激活通道蛋白3抗體Human PNRC2 ELISA Kit胸腺基質(zhì)淋巴生成(TSLP)

枯草芽孢桿菌枯草亞種腎臟和腦蛋白抗體Human PODXL2 ELISA Kit胸腺活化調(diào)節(jié)趨化因子(TARC/CCL17)

灰葡萄孢（灰霉病菌）有絲分裂驅(qū)動蛋白樣2B抗體Human PODN ELISA Kit胸腺依賴性抗原(TI-Ag)

卷枝毛霉詹森變型kelch樣蛋白9抗體Human POFUT1 ELISA Kit胸腺表達趨化因子(TECK/CCL25)

矮小青霉驅(qū)動蛋白家族成員15抗體Human POF1B ELISA Kit胸腺白血病抗原(TLa)

墻壁圣格爾根菌著絲點關(guān)聯(lián)蛋白1抗體Human POFUT2 ELISA Kit胸腎表達趨化因子(BRAK/CXCL14)

寬鱗大孔菌kelch樣蛋白5抗體Human PODXL2 ELISA Kit胸苷合成(TS)

異常威克漢姆酵母驅(qū)動蛋白家族成員C1抗體Human PODN ELISA Kit性激結(jié)合球蛋白(SHBG)

紫芝Kelch樣蛋白22抗體Human POFUT2 ELISA Kit性別決定區(qū)Y蛋白(SRY)

枯草芽孢桿菌電壓門控通道Kv4.1抗體Human POFUT1 ELISA Kit信號識別顆?？贵w(SRP)

炭黑曲霉敏感離子通道蛋白3抗體Human POF1B ELISA Kit信號傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子6(STAT6)

褪色（粘質(zhì)）Klotho多肽蛋白抗體Human POLD2 ELISA Kit信號傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子5(STAT5)

相思根瘤菌鈣激活通道蛋白4抗體Human POGK ELISA Kit信號傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子4(STAT4)

鴨疫里氏桿菌Kelch樣蛋白23抗體Human POLD1 ELISA Kit信號傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子3(STAT3)

黃桿菌BTB-kelch蛋白家族10抗體Human PNMAL1 ELISA Kit信號傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子2(STAT2)

釀酒酵母BTB-kelch蛋白家族4抗體Human PNCK ELISA Kit信號傳導(dǎo)子及轉(zhuǎn)錄激活子1(STAT1)

傳染性法氏囊病病毒Avibirnavirus│Infectious bursal disease virus 質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(GC)白屈菜紅堿

DH5α（含pUC19質(zhì)粒）大腸桿菌Escherichia coli DH5α( pUC19) 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)鹽藥根堿

ATCC19258資源名稱: 嗜熱鏈球菌 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T)異土木香內(nèi)酯
Tris-EDTA緩沖液PS ELISA Kit   小鼠磷脂酰絲氨suan規(guī)格： 48T

PC/CPG ELISA Kit   小鼠磷suan甘油酯規(guī)格： 48T

I CTP ELISA Kit  小鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽規(guī)格： 48T

Mouse nuclear Antibody,ANA ELISA Kit  小鼠抗核規(guī)格： 48T

KLH ELISA Kit   小鼠鑰孔蟲戚血藍蛋白規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實現(xiàn)，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當(dāng)細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評估細胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。