細(xì)胞線粒體分離試劑盒

細(xì)胞線粒體分離試劑盒公司正在銷售的產(chǎn)品：兔基質(zhì)裂解蛋白/基質(zhì)溶素(MAT)試劑盒Anti-GDNF Antibody磷酸化D激酶衰減蛋白1抗體
兔蛋白激酶C-ζ(PKCζ)試劑盒Anti-GFAP Antibody可溶性附著蛋白α-SNAP抗體
兔TATA框結(jié)合蛋白相關(guān)因子2(TAF2)試劑盒Anti-GFAP Antibody(0046)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子4抗體
兔蛋白激酶C-δ1(PKCδ

產(chǎn)品分類：細(xì)胞組分分離

儲(chǔ)存條件：—20℃,12個(gè)月

用途：快速分離動(dòng)物硬組織(如骨骼肌)中的線粒體的試劑盒

注意事項(xiàng)：分離線粒體的同時(shí)可以獲得去除線粒體的細(xì)胞漿蛋白,可用于分析細(xì)胞se素C等線粒體蛋白向胞漿的釋放,大部分獲得的線粒體都含有完整的內(nèi)膜和外膜,并具有線粒體的生理功能(如檢測(cè)線粒體膜電位),獲得的蛋白可用于SDS-PAGE、Western、雙向電泳等蛋白分析。

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購！

 

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對(duì)于需要更高密度來檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

灰黃霉(標(biāo)準(zhǔn)品) Ethionamide補(bǔ)體C1RL鏈多肽抗體包裝5g

灰黃霉（標(biāo)準(zhǔn)品） Etravirine周期M2抗體包裝100g

回西坦;（標(biāo)準(zhǔn)品） Famotidine周期T2抗體包裝25g

（標(biāo)準(zhǔn)品） Famotidine周期K抗體包裝5g

茴香（標(biāo)準(zhǔn)品） Febuxostat抗菌肽CAMP抗體包裝25g

肌(標(biāo)準(zhǔn)品) Febuxostat5號(hào)染色體開放閱讀框4抗體包裝5g

(標(biāo)準(zhǔn)品) Phenacetin4號(hào)染色體開放閱讀框44抗體包裝1g

肌酐（標(biāo)準(zhǔn)品） Phenacetin4號(hào)染色體開放閱讀框33抗體包裝5g

?。?biāo)準(zhǔn)品） Fingolimod HCL /FTY-7204號(hào)染色體開放閱讀框42抗體包裝1g

吉羅齊（標(biāo)準(zhǔn)品） Fingolimod HCL /FTY-7205號(hào)染色體開放閱讀框33抗體包裝5g

吉莫斯特;(標(biāo)準(zhǔn)品) Flufenamic acid9號(hào)染色體開放閱讀框89抗體包裝5mg

吉它霉（標(biāo)準(zhǔn)品） Flufenamic acid19號(hào)染色體開放閱讀框66抗體包裝1mg

己內(nèi)酰（標(biāo)準(zhǔn)品） Flumazenil21號(hào)染色體開放閱讀框55抗體包裝5g

（標(biāo)準(zhǔn)品） Flumazenil21號(hào)染色體開放閱讀框70抗體包裝25g

（標(biāo)準(zhǔn)品） Fluoxetine Hydrochloride胱抑A/半胱蛋白抑制劑A抗體包裝5g

里微球菌Micrococcus│lylae 質(zhì)量規(guī)格：>98%小扁豆結(jié)合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體3試劑盒五味子酯;Schisantherin

葡萄座腔菌Botryosphaeria│dothidea (Moug.) Ces. & De Not. 質(zhì)量規(guī)格：≥99.0%,BR小扁豆結(jié)合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體2試劑盒;Aconitine

小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格：含量>99.0%小扁豆結(jié)合型胎蛋白/胎蛋白異質(zhì)體1試劑盒五味子;Schisandrin A
細(xì)胞線粒體分離試劑盒OAT-3/FITC  熒光標(biāo)記陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-3IgG硫代硫鈉，五水 ACS, 99.5%

OAT4L/URAT1 /FITC  熒光標(biāo)記尿鹽重吸收轉(zhuǎn)運(yùn)子1IgG氫二鈉，十二水 AR，99%

obestatin/Ghrelin/GHRP /FITC  熒光標(biāo)記肥胖抑制IgG辛鈉 99%

OCLN(Occluding)/FITC  熒光標(biāo)記人咬合蛋白IgG卡拉膠 試劑級(jí)

ODC/FITC  熒光標(biāo)記抗鳥氨脫羧IgG果膠 半乳糖(干計(jì))≥74.0 %

OCT1 /FITC  熒光標(biāo)記陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)器1IgG單硬脂甘油酯 >60.0%(GC)

OCT2 /FITC  熒光標(biāo)記陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白2IgG鈦四丁酯 ≥99.0% (GC)

Oct-4/FITC  熒光標(biāo)記胚胎干關(guān)鍵蛋白IgG信封 5號(hào),1mm*220mm