硬組織線粒體分離試劑盒

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兔轉鐵蛋白受體2(TFR2)試劑盒Anti-GJA1 Antibody鈉離子/?；悄懰峁厕D運蛋白抗體
兔蛋白二硫化物異構酶A2(PDIA2)試劑盒Anti-GJA4 Antibody生長抑素14抗體
兔谷脫羧酶2(GAD2)試劑盒Anti-GJA3 Antibod

產品分類：細胞組分分離

儲存條件：—20℃,12個月

用途：適用于快速從動物硬組織(心肌、骨骼肌)或其他難以分離線粒體的組織中提取線粒體。

注意事項：采用梯度離心法分離線粒體外膜和內膜以及基質膜,大部分獲得的線粒體都含有完整的內膜和外膜

公司產品僅用于科研具有質量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點，咨詢并訂購！

 

配制與標定的實驗原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標準溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標定EDTA標準溶液的工作基準試劑，基準試劑的預處理：稱量前一般應先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標線，搖勻。

 

 

實驗方法與判定：

1.對照品溶液的穩(wěn)定性

2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱；柱溫120℃；進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應不低于10000。

4.實驗方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗證對照品溶液在使用期內穩(wěn)定可靠。

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉株的工作濃度需要根據細胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉染宿主細胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應曲線）來實現(xiàn)，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。

2）  根據細胞類型，設定合適范圍內的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉染細胞生長的恰當濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉染細胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉染細胞的篩選

1）  轉染48h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評估細胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

磺加貝酯（標準品） Glimepiride鈣粘附蛋白8抗體包裝1g

磺羅哌（標準品） Griseofulvin;Fulcin6號染色體開放閱讀框174抗體包裝5g

磺帕珠沙星（標準品） Griseofulvin6號染色體開放閱讀框150抗體包裝25g

磺培沙星（標準品） Sodium hyaluronateX染色體開放閱讀框56抗體包裝5g

磺齊西（標準品） Hydrocortisone9號染色體開放閱讀框152抗體包裝25g

磺（標準品） Hydrocortisone6號染色體開放閱讀框58抗體包裝5g

基斑蝥（標準品） Ibutilide fumarate 接觸蛋白相關蛋白4抗體包裝1g

基丁香（標準品） Ibutilide fumarate CD24抗體包裝1g

基原(標準品) Isepamicine Sulphate接觸蛋白相關蛋白3抗體包裝100g

硫二馬(標準品) BexaroteneCD24抗體包裝25g

硫新斯的明(標準品) Bexarotene限局性核因子3抗體包裝1g

巰咪唑(標準品) Ketoprofen胰羧肽A6抗體包裝250mg

巰咪唑（標準品） Ketoprofen9號染色體開放閱讀框150抗體包裝5g

硝唑(標準品) Ketotifen fumarate鈣粘附蛋白9抗體包裝1g

硝唑雜質A（2-基-5-硝基咪唑）標準品 Ketotifen fumarate鈣粘蛋白15抗體包裝5g

AS3.951資源名稱: 米曲霉 質量規(guī)格：>99%,USP腺苷環(huán)化1試劑盒五味子乙;Schisandrin B

: 75-049資源名稱: O1群霍亂弧菌 質量規(guī)格：HPLC>98%,標準品腺苷三磷結合盒轉運體G2試劑盒土克甾;Turkesterone

蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis 質量規(guī)格：>98%,USP32腺苷三磷結合盒轉運體A1試劑盒土貝母皂苷乙;TubeiMoside I
硬組織線粒體分離試劑盒OPGL/RANKL/CD254 /FITC  熒光標記骨保護蛋白配體IgG AR,98.0%

RANK/TNFRSF11A/CD265/FITC  熒光標記核轉錄因子NF-κB受體IgG高 AR

OPN/FITC  熒光標記骨橋蛋白IgG偶氮胭脂紅B Biological stain

OPN/FITC  熒光標記骨橋蛋白IgG化鉍 AR

ORX-A/FITC  熒光標記增食欲-A/欲激AIgG化鉍 CP

Osx /FITC  熒光標記成骨相關轉錄因子IgG化鉍 99.99% metals basis，無水級

Os05g/0477200 protein /FITC  熒光標記抗水稻白葉枯病菌Os05g0477200蛋白IgG化鉍 99.999% metals basis，無水級

OTR/FITC  熒光標記縮宮受體IgG二苯磺鋇 CP