細(xì)胞核懸浮基液

細(xì)胞核懸浮基液公司正在銷售的產(chǎn)品：兔肝配蛋白A受體1 (EPHA1)試劑盒Anti-FGFR2 Antibody分選連接蛋白6抗體
兔C4結(jié)合蛋白β(C4BPβ)試劑盒 Anti-FGR Antibody生成相關(guān)蛋白3抗體
兔Toll樣受體9(TLR9/CD289)試劑盒Anti-FGG Antibody磷酸化非受體氨酸激酶c-Abl抗體
兔球蛋白G1(IgG1)試劑盒Anti-FGFR4 An

產(chǎn)品分類：細(xì)胞組分分離

儲(chǔ)存條件：4℃,3個(gè)月

用途：分離細(xì)胞核膜

注意事項(xiàng)：主要由蔗糖、氯化鎂、蛋白酶抑制劑等組成。

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購！

 

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對(duì)于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

(標(biāo)準(zhǔn)品) ProbenecidC型凝集結(jié)構(gòu)域家族9成員A抗體包裝5mg

白藜蘆（標(biāo)準(zhǔn)品） Norfloxacin腦鈣粘蛋白12抗體包裝1g

（標(biāo)準(zhǔn)品） Norfloxacin鈣粘蛋白20抗體包裝1g

棓酯（標(biāo)準(zhǔn)品） Norfloxacin HCl鈣粘蛋白29抗體包裝5g

胞嘧啶(標(biāo)準(zhǔn)品) Norfloxacin HClCD200受體抗體包裝1g

胞嘧啶核苷,胞苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Indometacin鈣粘蛋白26抗體包裝5g

（標(biāo)準(zhǔn)品） Indometacin鈣粘蛋白14抗體包裝50mg

鈣(標(biāo)準(zhǔn)品) Cimetidine鈣激活離子通道蛋白3抗體包裝1g

貝格（標(biāo)準(zhǔn)品） CimetidineCD200受體抗體包裝5g

貝那普/那普（標(biāo)準(zhǔn)品） Adefovir dipivoxil彈性蛋白1抗體包裝1g

（標(biāo)準(zhǔn)品） Adefovir dipivoxil干生長因子受體/表面分化抗原抗體包裝5g

蓓薩羅丁(標(biāo)準(zhǔn)品) R-Pramipexole Dihydrochloride MonohydrateCD99樣蛋白2抗體包裝1g

酯（標(biāo)準(zhǔn)品） Clozapine鈣粘蛋白相關(guān)蛋白CTNNA3抗體包裝250mg

諾龍（標(biāo)準(zhǔn)品） Clozapine緊密連接蛋白15抗體包裝1g

丁氮芥（標(biāo)準(zhǔn)品） Enrofloxacin 緊密連接蛋白12抗體包裝5g

皮氏羅爾斯通氏菌Ralstonia│pickettii 質(zhì)量規(guī)格：>97%血管內(nèi)皮鈣粘著蛋白復(fù)合體試劑盒夏佛塔苷;Schaftoside

白僵菌Beauveria│sp. 質(zhì)量規(guī)格：含量測定血管緊張轉(zhuǎn)化2試劑盒小白菊內(nèi)酯;Parthenolide

百日咳博德特氏菌Bordetella│pertussis 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR血管緊張?jiān)噭┖行苋パ跄?Ursodeoxycholi
細(xì)胞核懸浮基液Phospho-p95/NBS1 (Ser343) /FITC  熒光標(biāo)記化DNA修復(fù)蛋白NBS1IgG2,2,2-三氟 98%

N-cadherin /FITC  熒光標(biāo)記N-鈣粘附分子IgG7,7,8,8-四苯醌二 98%

CD171/NCAM-L1/FITC  熒光標(biāo)記神經(jīng)粘附分子配體1IgG2-(三氟)烯 98%

CD172a/SIRP Alpha/FITC  熒光標(biāo)記信號(hào)調(diào)節(jié)蛋白αIgG二亞砜  >99.8%(GC)

NCF/NCF4/p40phox/FITC  熒光標(biāo)記嗜中性粒胞漿因子4IgG二亞砜 電子級(jí)

nck2/FITC  熒光標(biāo)記NCK銜接因子蛋白2IgG壬二 99%

NCOA2/KAT13C /FITC  熒光標(biāo)記核受體輔助激活蛋白2IgG壬二  technical, ~85% (GC)

NCoR1 /FITC  熒光標(biāo)記核受體輔助抑制因子1IgG3-芐-5-(2-羥)-4-化噻唑鎓 98%