試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
商品介紹:
測(cè)定意義GBSS(EC 2.4.1.21)以束縛態(tài)存在于淀粉體中,催化淀粉鏈的加長(zhǎng)反應(yīng),主要負(fù)責(zé)直鏈淀粉的合成。測(cè)定原理GBSS催化ADPG與淀粉引物(葡聚糖)反應(yīng),將葡萄糖分子轉(zhuǎn)移到淀粉引物上,同時(shí)生成ADP;進(jìn)一步通過反應(yīng)體系中添加的丙酮酸激酶、己糖激酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶依次催化NADP+還原為NADPH,其中NADPH生成量與前一步反應(yīng)生成的ADP數(shù)量呈正比,通過340nm下測(cè)定NADPH的增加量,可以計(jì)算GBSS活性。需自備的的儀器和用品紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
商品屬性:
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:按照血清(漿)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提取:按照組織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:按照組織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
Clematiunicinoside E英文名: Methyl Green磷化胰島受體底物-1抗體包裝1g
Clematomandshurica saponin ...英文名: Alizarin green磷化胰島受體底物-1抗體包裝5g
Corylifol A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Naphthol Green B磷化胰島受體底物-1抗體包裝25g
Crassicauline A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Fast Green FCF白介28B抗體包裝5g
Crovatin英文名: Alphazurine A即刻早期應(yīng)答基因2蛋白抗體包裝1g
Croverin英文名: Light Green SF Yellowish三磷肌抗體包裝1g
D(十)-無葡萄糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Janus Green B白介18結(jié)合蛋白抗體包裝5g
D-(-)-奎寧(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Guinea Green B草酰琥珀脫羧抗體包裝25g
D-阿伯糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Lissamine™ Green BIgLON家族蛋白5抗體包裝5g
D-果糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Acid Green A鋅指蛋白IKAROS抗體包裝500g
D-四氫藥根堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Indocyanine Green免疫球蛋白j鏈抗體包裝1g
D-松(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Indigotin5-三磷肌受體1抗體包裝5g
DL-薄荷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Methyl blue5-三磷肌受體2抗體包裝1g
Euojaponine D英文名: Evans BlueDNA結(jié)合抑制因子3抗體包裝100g
Eupeasaponin I英文名: Trypan Blue誘導(dǎo)協(xié)同激分子配體CD275抗體包裝25g
ATCC10248=LMG2216資源名稱: 唐菖蒲伯克霍爾德氏菌 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品亮基肽3試劑盒8-姜;8-Gingerol
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR鏈激試劑盒6-姜;6-Gingerol
楊鏈格孢Alternaria│populi 質(zhì)量規(guī)格:>98%,標(biāo)準(zhǔn)品連蛋白試劑盒2-金剛烷;2-Adamantanol
結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)測(cè)試盒50管/48樣木犀青霉 3-苯乙炔硫氧化還原蛋白Elisa
葡萄球?qū)?/span> 3-乙炔線粒體呼吸鏈復(fù)合物IElisa
丁香假單胞 二基硅烷線粒體呼吸鏈復(fù)合物IIElisa
馬來西亞鏈霉 3,6-壬二烯(異構(gòu)體的混合物)線粒體呼吸鏈復(fù)合物IIIElisa
鮑氏桑黃 2-乙炔苯線粒體呼吸鏈復(fù)合物IVElisa
黃曲霉 5-溴-2-氟吡啶總抗氧化能力Elisa
大豆慢生根瘤 2,5-二溴三氟甲苯超氧陰離子Elisa
漢遜德巴酵母 3-羥基異喹啉總蛋白Elisa
糙孢曲霉 芐基二苯基膦總蛋白Elisa
鏈格孢 三環(huán)戊基膦核孤兒受體4A1Elisa
貝形側(cè)耳、鷹翅 化鈀9-順式環(huán)氧類胡蘿卜雙加氧Elisa
考克氏 對(duì)酸甲酯9-順式環(huán)氧類胡蘿卜雙加氧Elisa
構(gòu)巢曲霉 硫酸鈰水合物內(nèi)源Elisa
產(chǎn)氨棒桿 L(-)-阿洛糖β-胡蘿卜羥化Elisa
核盤 Fmoc-N'-三氟乙?;?L-賴擴(kuò)展蛋白Elisa