DTT溶液

DTT溶液公司正在銷售的產(chǎn)品：Anti-SERPINA11 Antibody人抗組蛋白抗體
Anti-SERINC3 Antibody抗髓鞘少樹突膠質(zhì)糖蛋白(人)
Anti-SERPINA1 Antibody人晶體蛋白α
Anti-SERPINB3 Antibody大鼠C反應(yīng)蛋白
Anti-SERPINB4 Antibody小鼠糖原磷酸化酶同工酶BB
Anti-SERPINE1 Antibody大

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購！

產(chǎn)品分類：RNA溶液

儲(chǔ)存條件：—20℃,12個(gè)月

用途：是巰基化DNA的還原劑和去保護(hù)劑,可以用于還原蛋白質(zhì)中二硫鍵。

注意事項(xiàng)：無菌溶液,經(jīng)過濾除菌處理。Dithiothreitol簡(jiǎn)稱DTT,是一種小分子有機(jī)還原劑,其還原狀態(tài)下為線性分子,被氧化后變?yōu)榘蜴I的六元環(huán)狀結(jié)構(gòu)。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

嗜熱鏈球菌磷化谷受體1抗體Human MMP-9(Matrix Metalloproteinase 9) ELISA Kit紅生成受體(EPOR)

Aquibacillus halophilus磷化谷受體1抗體Human MYD88(Myeloid differentiation primary response protein MyD88) ELISA Kit紅生成(EPO)

角鱗灰鵝膏菌神經(jīng)束蛋白186抗體Human KLK10/NES1(Kallikrein-10) ELISA Kit紅膜蛋白(EMP)

鐮孢菌磷化泛連接NEDD4-2抗體Human NGF/NGFβ(Beta-nerve growth factor) ELISA Kit紅激因子(ESF)

泡囊短波單胞菌磷化核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體Human NID-1(Nidogen-1/Entactin) ELISA Kit橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α(sm Actinin-α)

溜曲霉磷化谷受體1抗體Human MFGE8(Lactadherin) ELISA Kit亨廷頓相關(guān)蛋白1(HAP1)

酵母菌類固受體激活蛋白2抗體Human MMP-9(Matrix Metalloproteinase 9) ELISA Kit黑瘤衍生亮鏈額外核因子(MLZE)

緊密青霉胚胎干關(guān)鍵蛋白抗體Human MYD88(Myeloid differentiation primary response protein MyD88) ELISA Kit黑色抗體(MC Ab)

枯草芽孢桿菌核小體組裝蛋白1抗體Human Mer/MERTK(Tyrosine-protein kinase Mer) ELISA Kit黑色激(MSH)

葡萄座腔菌N-鈣粘附分子抗體Human KLK10/NES1(Kallikrein-10) ELISA Kit黑色濃縮激(MCH)

釀酒酵母核受體輔助抑制因子1抗體Human PIM-1(Serine/Threonine-protein Kinase Pim-1) ELISA Kit黑色瘤轉(zhuǎn)移表面黏附分子(MMSAM)

單色革蓋菌腎小球粘附分子受體抗體Human C-ERC(Mesothelin) ELISA Kit黑色瘤相關(guān)抗原D4(MAGED4/MAGED4B)

鹽古桿菌巢蛋白/神經(jīng)上皮干蛋白抗體Human KLK6(Kallikrein-6) ELISA Kit黑色瘤活性抑制蛋白(MIA)

蒂莫內(nèi)馬賽菌巢蛋白/神經(jīng)上皮干蛋白抗體Human SERPINA4(Kallistatin) ELISA Kit黑色瘤標(biāo)記物(MART/Melan-A)

黑芝蛋白激錨定蛋白抗體Human KIM-1(Kidney Injury Molecule 1) ELISA Kit核轉(zhuǎn)錄因子κBp65(NFκBp65)

枯草芽孢桿菌絲或半胱蛋白水解抑制蛋白1抗體Human SCFR/c-Kit(Stem Cell Factor Receptor) ELISA Kit核轉(zhuǎn)錄因子κB(NFκB)

同溫層芽孢桿菌Bacillus│stratosphericus 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR，可用于培養(yǎng)大黃

海綿假單胞菌Pseudomonas│pachastrellae 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品大黃

蠟樣芽孢桿菌Bacillus│cereus 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR大黃
DTT溶液Amylin(Mouse Amylin) ELISA Kit  小鼠胰淀su規(guī)格： 48T

Free-T3(Mouse Free Tri-iodothyronine Indes) ELISA Kit  小鼠游離三碘jia狀腺原氨suan規(guī)格： 48T

LTC4(Mouse Leukotriene C4) ELISA Kit  小鼠白三烯C4規(guī)格： 48T

Cyt-C(Mouse Cytochrome-C) ELISA Kit  小鼠細(xì)胞色suC規(guī)格： 48T

FT4(Mouse Free Thyroxine) ELISA Kit  小鼠游離jia狀腺su規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對(duì)于需要更高密度來檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。