碘乙酰胺溶液

碘乙酰胺溶液公司正在銷(xiāo)售的產(chǎn)品：Anti-ZKSCAN5 Antibody人β羥丁酸
Anti-ZIC1 Antibody人高密度脂蛋白膽固
Anti-ZMYM4 Antibody人N端中段骨鈣素
Anti-ZMYND11 Antibody人低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白6
Anti-ZKSCAN4 Antibody人低密度脂蛋白受體
Anti-ZMYND11 Antibody人低密度脂蛋白受體
Ant

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產(chǎn)品分類(lèi)：酶抑制劑

儲(chǔ)存條件：—20℃,避光,12個(gè)月

用途：蛋白酶抑制劑

注意事項(xiàng)：主要由碘乙酰胺iodacetamide等組成，不含EDTA。提取出來(lái)的蛋白可以用于Western Blot、免疫共沉淀等試驗(yàn)。工作濃度是10-100umol/L。亦有用10mmol/L。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱(chēng)量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱(chēng)量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱(chēng)取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

鏈輪枝菌環(huán)指蛋白121抗體Anti-DCK Antibody粘蛋白5B(MUC5B)

假單胞菌屬環(huán)指蛋白169抗體Anti-DCN Antibody粘蛋白5AC(MUC5AC)

毛木耳環(huán)指蛋白113A抗體Anti-DCC Antibody粘蛋白4(MUC4)

枯草芽孢桿菌枯草亞種（現(xiàn)貨）環(huán)指蛋白43抗體Anti-DCN Antibody(PB0132)粘蛋白21(MUC21)

米舒青霉腫瘤血管內(nèi)皮標(biāo)記蛋白2抗體Anti-DCN Antibody粘蛋白20(MUC20)

根瘤菌環(huán)指蛋白14抗體Anti-DCX Antibody粘蛋白17(MUC17)

新城疫病RAS相關(guān)GTP結(jié)合蛋白A抗體Anti-DDAH1 Antibody粘蛋白13(MUC13)

楊樹(shù)菇絲蘇激1受體相互作用蛋白抗體Anti-DDAH2 Antibody粘蛋白12(MUC12)

布蘭克假絲酵母CASP2凋亡相關(guān)蛋白抗體Anti-DDB1 Antibody(PB0607)粘蛋白1(MUC1)

瑞士乳桿菌DNA修復(fù)和重組蛋白R(shí)AD54B抗體Anti-DDB2 Antibody增殖關(guān)聯(lián)蛋白2G4(PA2G4)

玉蜀黍赤霉菌畸胎瘤癌基因RAS相關(guān)病抗體Anti-DDIT3 Antibody造血蛋白1(HEM1)

乳乳球菌霍氏亞種Ras-GTP激活蛋白3抗體Anti-DDB2 Antibody造血蛋白(HEMGN)

神經(jīng)內(nèi)分泌特異性蛋白抗體Anti-DDR1 Antibody造骨鈣黏蛋白(CDHOB)

接骨木鐮孢視黃脫氫11/型肝炎病核心蛋白抗體Anti-DDR1 Antibody皂(Haponin)

釀酒酵母維甲相關(guān)孤兒受體β抗體Anti-DDR2 Antibody早幼粒白血病蛋白(PML)

黃綠木霉G蛋白GTP-GDP解離激因子1抗體Anti-DDT Antibody早期生長(zhǎng)應(yīng)答因子4(EGR4)

ATCC9372資源名稱(chēng): 芽孢桿菌 質(zhì)量規(guī)格：BR，98.5%

灰平鏈霉菌Streptomyces│griseoplanus Backus et al. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

柳樹(shù)爛皮病Cytospora│salicis (Corda) Rabenh. 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR
碘乙酰胺溶液ASIC1/BNaC2/FITC  熒光su標(biāo)記suan敏感離子通道1IgG規(guī)格： 0.2ml

ASK1/MAPKKK5 /FITC  熒光su標(biāo)記細(xì)胞凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激mei1/絲裂原活化蛋白激mei激mei激mei5IgG規(guī)格： 0.2ml

ASK1(phospho Ser83) /FITC  熒光su標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷suan化細(xì)胞凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激mei1IgG規(guī)格： 0.2ml

phospho-ASK1(Thr845) /FITC  熒光su標(biāo)記兔抗人、小鼠磷suan化細(xì)胞凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激mei1IgG規(guī)格： 0.2ml

ASK1(phospho Ser967) /FITC  熒光su標(biāo)記兔抗人、大、小鼠磷suan化細(xì)胞凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激mei1IgG規(guī)格： 0.2ml

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類(lèi)型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。