λ退火緩沖液

λ退火緩沖液公司正在銷(xiāo)售的產(chǎn)品：Anti-Phospho PTPN3 (PTPH1)(Ser459) Antibody人H-ras
Anti-Phospho RAD17 (Ser646) Antibody大鼠α1酸性糖蛋白
Anti-Phospho RAF1 (Ser301) Antibody人c-sis
Anti-Phospho RAF1 (Ser642) Antibody小鼠一氧化氮合成酶
A

產(chǎn)品分類(lèi)：DNA溶液

儲(chǔ)存條件：室溫,12個(gè)月

用途：緩沖液

注意事項(xiàng)：無(wú)菌溶液，主要由Tris、氯化鎂組成。

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢(xún)并訂購(gòu)！

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱(chēng)量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱(chēng)量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱(chēng)取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類(lèi)型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

松鼠葡萄球菌磷化抑癌蛋白EZH2抗體Human PPP1R9A ELISA Kit血漿抗凝蛋白S(PS)

Pseudomonas batumici 組蛋白去甲基化JARID1B抗體Human PPP1CC ELISA Kit血漿抗凝蛋白C(PC)

少孢哈薩克斯坦酵母硫角質(zhì)抗體Human PPP3R2 ELISA Kit血漿(KLKB1)

玫煙色棒束孢角質(zhì)生長(zhǎng)因子調(diào)節(jié)蛋白2抗體Human PPP2CA ELISA Kit血漿膽固酯轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)

Bacillus sp.離子通道蛋白G蛋白4抗體Human PPP2R1B ELISA Kit血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)

海假交替單胞菌通道多聚體結(jié)構(gòu)域KCTD18抗體Human PPP2CB ELISA Kit血紅氧合2(HO-2)

多主葡萄殼菌胞質(zhì)接頭蛋白Keap1Human PPP1CC ELISA Kit血紅氧合1(HO-1)

芽胞桿菌舞蹈癥相關(guān)蛋白KALRN抗體Human PPP1R10 ELISA Kit血紅加氧2(HO-2)

多粘類(lèi)芽孢桿菌內(nèi)流通道蛋白Kir4.1抗體Human PPP2R2A ELISA Kit血紅加氧1(HO-1)

金黃亞種樣蛋白3抗體Human PPP2R2B ELISA Kit血紅加氧(HO)

釀酒酵母KLF樣轉(zhuǎn)錄因子7抗體Human PPP1R7 ELISA Kit血紅蛋白晚期糖基化終末產(chǎn)物(Hb-AGE)

枯草芽孢桿菌Kelch樣蛋白8抗體Human PPP3CB ELISA Kit血紅蛋白β亞基(HB-β)

雞新城疫病血凝抑制試驗(yàn)（HI）陽(yáng)性血清離子通道蛋白家族KCNQ2抗體Human PPP1R8 ELISA Kit血紅蛋白α亞基(HB-α)

黑曲霉離子通道多聚體結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體Human PPP3CC ELISA Kit血紅蛋白H(HbH)

黃桿菌通道蛋白1抗體Human PPP1R9A ELISA Kit血紅蛋白C(HbC)

大斑凸臍蠕孢電壓門(mén)控通道蛋白1抗體Human PPP3R2 ELISA Kit血紅蛋白(Hb)

新城疫病毒Rubulavirus│Newcastle disease virus 質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)去氫木香內(nèi)酯

蘇云金芽孢桿菌Bacillus│thuringiensis 質(zhì)量規(guī)格：>97.0%(T)百秋李

巴斯德畢赤酵母Pichia│pastoris 質(zhì)量規(guī)格：>96.0%(GC)β-胡蘿卜
λ退火緩沖液Mouse mucin-5 subtype B,MUC5B ELISA kit  小鼠粘蛋白/粘液su5B規(guī)格： 48T

Mouse pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP ELISA Kit   小鼠垂體腺suan環(huán)化mei激活肽規(guī)格： 48T

Mouse single stranded DNA Antibody,ssDNA ELISA Kit  小鼠抗單鏈DNA/變性DNA規(guī)格： 48T

Mouse phosphatidylserine,PS ELISA Kit  小鼠磷脂酰絲氨suan規(guī)格： 48T

Mouse choline phosphoglyceride,PC/CPG ELISA Kit  小鼠磷suan甘油酯規(guī)格： 48T