Pfu DNA Polymerase

Pfu DNA Polymerase公司正在銷售的產(chǎn)品：Anti-SCN2B Antibody小鼠孕/孕酮
Anti-SCN2B Antibody小鼠可溶性核因子κB受體活化因子配基
Anti-SCN4B Antibody大鼠腦鈉素/腦鈉尿肽
Anti-SCNN1D Antibody人抗Ku抗體
Anti-SCN7A Antibody人抗IgA抗體
Anti-SCN4A Antibody大鼠前列腺

產(chǎn)品分類：PCR相關(guān)

儲(chǔ)存條件：—20℃,36個(gè)月

用途：高保真DNA聚合酶

注意事項(xiàng)：保真性高于普通Taq DNA聚合酶,附送10x PCR buffer。

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購(gòu)！

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。

青霉核孔復(fù)合體蛋白抗體Human MMP14(Matrix metalloproteinase-14) ELISA Kit低密度脂蛋白受體(VLDLR)

血桿菌神經(jīng)性因子ICP34.5（人單純皰疹病Ⅰ型）抗體Human CYFRA21-1(CytokeRatin Fragment Antigen 21-1) ELISA Kit低密度脂蛋白(VLDL)

三葉膠灰星菌背板膠質(zhì)乙酰酯抗體Human HE4(Epididymal Protein 4) ELISA Kit8(KLK 8)

假灰鏈霉菌神經(jīng)PAS結(jié)構(gòu)域蛋白3抗體Human NSE(Neuron-specific Enolase) ELISA Kit7(KLK 7)

佛雷德里克斯堡假單胞菌神經(jīng)增殖和分化調(diào)控蛋白1抗體Human PCT(Procalcitonin) ELISA Kit6(KLK 6)

戴爾福特菌屬NOTCH調(diào)節(jié)錨蛋白抗體Human U-II(Urotensin 2) ELISA Kit2(hK 2)

大腸埃希氏菌神經(jīng)囊泡膜蛋白1抗體Human CK-MB(Creatine Kinase MB) ELISA Kit11(KLK 11)

長(zhǎng)根靜灰球菌突觸生長(zhǎng)相關(guān)蛋白抗體Human GHRL(Ghrelin) ELISA Kit10(KLK 10)

虎掌菌*NDUFA9蛋白抗體Human VEGF(Vascular Endothelial Cell Growth Factor) ELISA Kit1(KLK 1)

枯草芽孢桿菌間變性淋巴瘤激核相互作用伴侶蛋白抗體Human VEGF-C(Vascular Endothelial Growth Factor C) ELISA Kit激敏感脂肪(HSL)

傳染性支氣管炎病磷化間變性淋巴瘤激核相互作用伴侶蛋白抗體Human TNFRSF13C/BAFFR(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13C) ELISA Kit激敏感性脂肪(HSL)

Formosa核仁和紡錘體相關(guān)蛋白1抗體Human TNFRSF13B/TACI(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 13B) ELISA Kit激活A(yù)(Activin A)

枯草芽孢桿菌心臟特異性同源盒轉(zhuǎn)錄因子NKX2.5抗體Human VEGFR2/KDR(Vascular endothelial growth factor receptor 2) ELISA Kit激動(dòng)異構(gòu)/分裂MB(CKMB)

隱花青鵝膏指(趾)關(guān)節(jié)粘連NOG蛋白抗體Human TNFRSF14/HVEM(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 14) ELISA Kit基質(zhì)衍生因子1β(SDF-1β/SDF1B)

艾高夫氏亮菌核小體結(jié)合蛋白1抗體Human TNFRSF4/OX40(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 4) ELISA Kit基質(zhì)衍生因子1β(SDF-1β/CXCL12)

粗壯假絲酵母軸突蛋白1(Neurexin 1α)抗體Human TNFRSF5/CD40(Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5) ELISA Kit基質(zhì)衍生因子1β(SDF-1β)

擬盤多毛孢Pestalotiopsis│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>95%,BR,M.W:4000冬凌草

發(fā)酵乳桿菌Lactobacillus│fermantum 質(zhì)量規(guī)格：>98%丹參鈉

: HBUM172298資源名稱: 鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品隱丹參
Pfu DNA PolymeraseLAT(Mouse Linker for activation of T cell) ELISA Kit  小鼠T細(xì)胞活化連接蛋白規(guī)格： 48T

EMAb(Mouse Endometrium Antibody) ELISA Kit  小鼠抗子宮內(nèi)膜規(guī)格： 48T

LDL-IC(Mouse LDL-IC) ELISA Kit  小鼠低密度脂蛋白免疫復(fù)合物規(guī)格： 48T

UU-Ab(Mouse Ureaplasma urealyticum antibody) ELISA Kit  小鼠解脲脲原體規(guī)格： 48T

GFAP(Mouse glial fibrillary acidic protein) ELISA Kit  小鼠神經(jīng)膠質(zhì)纖維suan性蛋白規(guī)格： 48T