改良Krebs-Henseleit溶液

改良Krebs-Henseleit溶液公司正在銷售的產(chǎn)品：豚鼠成纖維生長因子7(FGF7/KGF)試劑盒Anti-IL2 Antibody5色羥化酶2抗體
豚鼠纖調(diào)蛋白(FMOD)試劑盒 Anti-IL2 Antibody硫氧還蛋白11抗體
豚鼠鈣調(diào)素(CAM)試劑盒 Anti-IL22 Antibody微管蛋白4α抗體
豚鼠心肌營養(yǎng)素合成酶/心磷脂合酶(CLS)試劑盒 Anti-IL22 An

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購！

產(chǎn)品分類：細(xì)胞其他

儲存條件：4℃,3個月

用途：又稱Krebs-Henseleit Buffer Modified,同sigma-k3753。含碳suan氫鈉和鈣。pH7.2-7.8即可。作用類似于Ringer液，用于動物離體實(shí)驗(yàn),肌體灌流、清洗組織，并維持離體組織的正常生理功能。

注意事項(xiàng)：無菌溶液。主要含有葡萄糖、硫suan鎂、磷酸二氫鉀、氯化鈉等組成。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對照品溶液的穩(wěn)定性

2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對照品的峰面積計(jì)算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

3β-乙酰氧基-7,25-甘遂二烯-24(R)-（標(biāo)... Chitin磷化Ephrin B抗體包裝5g

4'-去鬼臼 Coenzyme A, free acid, hydrate (COA)磷化Ephrin B抗體包裝5mg

4'-去氧基表鬼臼（標(biāo)準(zhǔn)品） Paclobutrazol磷化雌激受體α抗體包裝5g

4-β-D-葡萄糖基-1,3,7-三羥基呫噸 Hydrazine sulfate磷化雌激受體α抗體包裝25g

4-基傘形-β-D-木糖苷 Polyphenol Oxidase from Mushrooms表皮生長因子受體底物8抗體包裝1g

4-羥基喹唑啉 Copper(II) sulfate, pentahydrate內(nèi)皮1抗體包裝1g

4-硝基兒茶(標(biāo)準(zhǔn)品) N-Acetyl-D-glucosamine腸道病71型/手足口病病抗體包裝5g

4’-O-基補(bǔ)骨脂查爾B Manganous sulfate monohydrate絲裂原活化蛋白激1抗體包裝25g

4β-羥基黃芪紫檀烷苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Rubidium chloride絲裂原活化蛋白激3抗體包裝5g

5,7,4'-三羥基-8-基二氫黃(標(biāo)準(zhǔn)品) Poly-L-lysine雌激受體α抗體包裝25g

5,7-二羥基色原 Span* 80雌激受體β 抗體包裝5g

5-O-基維斯阿米-4'-O-β-D-芹糖基-... PEG 1000上皮特異性抗原抗體包裝100g

5-O-基維斯阿米苷（標(biāo)準(zhǔn)品） Tryptone內(nèi)皮-1抗體包裝25g

5-羥基糠（標(biāo)準(zhǔn)品） DNSCl, Dansyl chloride天冬蛋白家族蛋白抗體包裝100g

5-羥色（標(biāo)準(zhǔn)品） N-Ethylmaleimide蝮蛇蛇蛋白抗體包裝25g

油污染土鞘菌Sphingobium│olei 質(zhì)量規(guī)格：>99%,USP32,A型羧化基質(zhì)谷蛋白試劑盒人參炔;Falcarinol，Pana

猴頭菇Hericium│erinaceus (Bull.) Pers. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品羧化不全骨鈣試劑盒肉豆寇單甘油酯;Monomyristi

鮑曼/醋鈣復(fù)合不動桿菌Acinetobacter│baunannii/calcoaceticus complex 質(zhì)量規(guī)格：>99%,可用于培養(yǎng)髓樣分化因子88試劑盒肉豆蔻甘油三酯;Tritetradec
改良Krebs-Henseleit溶液SP-A/FITC  熒光標(biāo)記肺表面活性蛋白AIgG

SPA-1/SIPA-1  熒光標(biāo)記抗信號感應(yīng)增殖相關(guān)蛋白 1IgG

SPAG5/map126 /FITC  熒光標(biāo)記抗相關(guān)抗原5IgG

SPARC/FITC  熒光標(biāo)記富含半胱氨的性分泌蛋白IgG

SP-B/FITC  熒光標(biāo)記肺表面活性蛋白BIgG

SP-D/FITC  熒光標(biāo)記肺表面活性蛋白DIgG

Spectrin- Alpha/FITC  熒光標(biāo)記血影蛋白/收縮蛋白IgG

SPHK1/FITC  熒光標(biāo)記鞘氨激1IgG

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。