商品屬性:
商品介紹:
測(cè)定意義: S-AI在pH 為4.5~5.0(酸性)條件下催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖,是土壤微生物蔗糖代謝關(guān)鍵酶之一。 測(cè)定原理: S-AI催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖,進(jìn)一步與3,5-二硝基水楊酸反應(yīng),生成棕紅色氨基化合物,在510nm有特征光吸收,在一定范圍內(nèi)510nm光吸收增加速率與AI活性成正比。 自備用品: 可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、移液器、1mL玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:按照血清(漿)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:按照組織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4。△A測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
蘇云金芽胞桿菌激活受體1C抗體Human HYDIN ELISA Kit小鼠巨噬炎性蛋白5(MIP-5)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌整合樣金屬蛋白與凝血13型抗體Human IFFO1 ELISA Kit小鼠巨噬炎性蛋白3β(MIP-3β/ELC/CCL19)免疫試劑盒
果生鏈核盤(pán)菌去整合樣金屬蛋白11抗體Human IFIT1L ELISA Kit小鼠巨噬炎性蛋白3α(MIP-3α/CCL20)免疫試劑盒
Nitriliruptor去整合樣金屬蛋白12抗體Human IAH1 ELISA Kit小鼠巨噬炎性蛋白2(MIP-2)免疫試劑盒
葡萄座腔菌去整合樣金屬蛋白15抗體Human IARS2 ELISA Kit小鼠巨噬炎性蛋白1δ(MIP-1δ/CCL15)免疫試劑盒
馬賽菌去整合樣金屬蛋白2抗體Human IFIT2 ELISA Kit小鼠巨噬炎性蛋白1β(MIP-1β/CCL4)免疫試劑盒
谷棒桿菌載脂蛋白E2受體抗體Human ICAM2(Intercellular adhesion molecule 2) ELISA Kit小鼠巨噬炎性蛋白1α(MIP-1α/CCL3)免疫試劑盒
短波單胞菌腺苷A1受體抗體Human ICA1L ELISA Kit小鼠巨噬來(lái)源的趨化因子(MDC/CCL22)免疫試劑盒
草菇水通道蛋白0抗體Human ICK ELISA Kit小鼠巨噬集落激因子(M-CSF)免疫試劑盒
釀酒酵母轉(zhuǎn)錄因子AP-2γ抗體Human IDH3G ELISA Kit小鼠金屬硫蛋白2(MT-2)免疫試劑盒
土曲霉血管生成相關(guān)蛋白5Human IDO2 ELISA Kit小鼠金屬硫蛋白1(MT-1)免疫試劑盒
膠孢錨蛋白重復(fù)域53抗體Human IDI2 ELISA Kit小鼠解整合樣金屬蛋白9(ADAM9)免疫試劑盒
傳染性支氣管炎病錨蛋白重復(fù)域54抗體Human IDNK ELISA Kit小鼠解整合樣金屬蛋白8(ADAM8)免疫試劑盒
根霉屬的菌ATP合成β5抗體Human HSPA1L ELISA Kit小鼠解脲脲原體抗體(UU-Ab)免疫試劑盒
猴頭菌肌側(cè)索硬化癥相關(guān)蛋白3抗體Human HUS1B ELISA Kit小鼠睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(CNTF)免疫試劑盒
色褐鏈霉菌腺苷A2b受體/神經(jīng)生長(zhǎng)因子1受體抗體Human HSPA13 ELISA Kit小鼠結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)免疫試劑盒
柴油食烷菌Alcanivorax│dieselolei 質(zhì)量規(guī)格:> 99%,BR白介17B試劑盒合氧化前胡
黃曲霉Aspergillus│flavus 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BC白介17A試劑盒松柏
W-50=CIP107174=DSM14551資源名稱: 威特弗里亞鞘盒菌 質(zhì)量規(guī)格:比活性:>200 U/mg,BC白介16試劑盒仙環(huán)
土壤酸性轉(zhuǎn)化酶(SAI)測(cè)試盒50管/24樣密叢毛霉 α,α-二乙酸酯脂肪甘油三酯脂Elisa
膠孢 1-芐基海因胱天蛋白1Elisa
籬邊粘褶 七氟異基活化受體樣激1Elisa
叢毛紅曲 4-乙氧基苯乙肝Elisa
墻支頂孢 2,5-二甲酯脫2Elisa
酵母 吲唑-4-羧酸脂肪酸酰水解1Elisa
食酸屬 7-羧基-1H-吲唑單酰基甘油酯Elisa
假委內(nèi)瑞鏈霉 基氧膦N-乙酰天門(mén)冬Elisa
釀酒酵母 1-芐基-4-甲角蛋白18Elisa
薄層桿 3-基-4-氟甲酯氫ATPElisa
弗吉尼亞鏈霉 2,3,5-三氟苯甲煙酰Elisa
Microbacterium halotolerans 6--咪唑并[1,2-b]吡-3-甲乙酸酯趨化Elisa
芽孢桿屬 1-甲基-5-硝基-1H-甲殼質(zhì)蛋白40Elisa
白僵 4-丁縮二甲半胱蛋白11Elisa
奇異球 環(huán)丁半胱蛋白1βElisa