軟骨染色液

軟骨染色液公司正在銷售的產(chǎn)品：豚鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)試劑盒Anti-Neurotrophin 3/NTF3 Antibody鋅指蛋白297抗體
豚鼠T活化連接蛋白(LAT)試劑盒Anti-NES Antibody鋅指蛋白ZBTB12抗體
豚鼠抑瘤素M(OSM)試劑盒Anti-Nephrin(NPHS1) Antibody負(fù)調(diào)控因子白介素2抗體
豚鼠低分子肝素(LMWH)試劑盒 Anti

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購(gòu)！

產(chǎn)品分類：骨組織染色

儲(chǔ)存條件：室溫,避光,12個(gè)月

用途：軟骨染色

注意事項(xiàng)：硼酸鹽溶液配制,甲苯胺藍(lán)中的陽(yáng)離子與組織細(xì)胞的酸性物質(zhì)結(jié)合而被染色。染色結(jié)果為：細(xì)胞核呈藍(lán)色,而肥大細(xì)胞胞質(zhì)內(nèi)含有肝素等異色性物質(zhì)呈異染性紫紅色。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

三白草（標(biāo)準(zhǔn)品） Fluorescein Chloride 磷化G蛋白偶聯(lián)受體激相互作用蛋白1抗體包裝5g

三白草（標(biāo)準(zhǔn)品） 2',7'-Dichlorofluorescein磷化G蛋白偶聯(lián)受體激相互作用蛋白1包裝1g

三叉苦（標(biāo)準(zhǔn)品） 2,3-Diaminonaphthalene葡萄糖激調(diào)節(jié)蛋白抗體包裝5g

三尖杉?jí)A(標(biāo)準(zhǔn)品) Dimidium BromideGTP結(jié)合蛋白10抗體包裝1g

三尖杉寧堿(標(biāo)準(zhǔn)品） 7-(Dimethylamino)-4-methylcoumarin磷化Ras GTP活化蛋白結(jié)合蛋白1抗體包裝5g

三角葉 7-(Dimethylamino)-4-(trifluoromethyl)coumarinRas GTP活化蛋白結(jié)合蛋白1抗體包裝25g

三棱（標(biāo)準(zhǔn)品） 7-(Diethylamino)coumarin-3-carboxylic Acidγ基丁γ2受體/GABAA Rγ2抗體包裝5g

三七（標(biāo)準(zhǔn)品） Ethyl 6-[4-(Diphenylamino)phenyl]coumarin-3-carboxylate磷化糖原合激3β抗體包裝1g

三七皂甙R1（標(biāo)準(zhǔn)品） Uranine K磷化G蛋白偶聯(lián)受體激相互作用蛋白1抗體包裝100g

三七皂苷Fa Fluorescein Diacetate磷化珠蛋白轉(zhuǎn)錄因子1抗體包裝25g

三七皂苷Fe(標(biāo)準(zhǔn)品) 7-Hydroxycoumarin-3-carboxylic Acid磷化珠蛋白轉(zhuǎn)錄因子1抗體包裝5g

三七皂苷Ft1（標(biāo)準(zhǔn)品） 7-Diethylamino-4-methylcoumarinG蛋白偶聯(lián)受體激相互作用蛋白1抗體包裝100g

三七皂苷R2(R型)(標(biāo)準(zhǔn)品) Methyl Calcein Blue Hydrate磷化GATA結(jié)合蛋白6抗體包裝25g

三七皂苷R2(S型)(標(biāo)準(zhǔn)品) 6,7-Methylenedioxy-4-methyl-3-maleimidocoumarin磷化γ基丁γ2受體/GABAA Rγ2抗體包裝5g

（標(biāo)準(zhǔn)品） 4-Methyl-6,7-methylenedioxycoumarin胰高血糖受體抗體包裝100g

嗜松青霉Penicillium│pinophilum 質(zhì)量規(guī)格：≥99%鳥(niǎo)脫羧試劑盒乙;Tripdiolide

: B90資源名稱: 產(chǎn)氣腸桿菌 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品黏著斑激試劑盒硫秋仙苷;Thiocolchicosi

芽孢桿菌Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>99%,AR黏膜地址黏附分子試劑盒硫長(zhǎng)春堿;Vinblastine su
軟骨染色液Rad51  Rad51抗原規(guī)格： 0.5mg

RAP1A (RAS-related protein-1a precursor)  Rap1A抗原規(guī)格： 0.2ml

RAR- Beta(Retinoic acid -R- Beta)  維jiasuan受體-β抗原規(guī)格： 0.5mg

RASSF1A(Ras association domain family 1A)  Ras相關(guān)區(qū)域家族1A抗原規(guī)格： 0.5mg

Resistin  抵抗su抗原規(guī)格： 0.5mg

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。