商品介紹:
測(cè)定意義: Hephaestin (HP)作為銅藍(lán)蛋白的同系物,是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白亞鐵氧化酶,HP屬亞鐵氧化酶家族成員,具有亞鐵氧化酶的活性,參與體內(nèi)鐵代謝。HP的表達(dá)可受鐵、銅及鋅等金屬離子的調(diào)節(jié)。HP催化Fe2+氧化生成Fe3+,在介導(dǎo)鐵的跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)中有重要作用。 測(cè)定原理: HP催化Fe2+氧化為Fe3+,F(xiàn)e2+和ferrozine反應(yīng)顯色,在560 nm下有特征吸光值。通過(guò)測(cè)定Fe2+的減少速率可測(cè)得亞鐵氧化酶的活性。 自備用品: 酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
商品屬性:
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提取:
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提取: NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
球孢白僵菌克侖特羅/抗體Human α1-AT(Alpha 1-Antitrypsin) ELISA Kit人角蛋白18-M30(CK 18-M30)免疫試劑盒
枯草芽孢桿菌斯氏亞種6號(hào)染色體開放閱讀框151抗體Human α2-AP(α2-Antiplasmin) ELISA Kit人角蛋白18(CK-18)免疫試劑盒
秦氏蜜環(huán)菌15號(hào)染色體開放閱讀框52抗體Human αHSP(Alpha-Hemoglobin Stabilizing Protein) ELISA Kit人間粘附分子3(ICAM-3/CD50)免疫試劑盒
嗜鹽擬諾氏菌2號(hào)染色體開放閱讀框89抗體Human β-actin(Beta actin) ELISA Kit人間粘附分子2(ICAM-2/CD102)免疫試劑盒
瘦弱鹽扁平菌BCL10結(jié)合蛋白和激活核轉(zhuǎn)錄因子抗體Human ACP(Acid phosphatase) ELISA Kit人間粘附分子1(ICAM-1/CD54)免疫試劑盒
相思根瘤菌凋亡加強(qiáng)結(jié)構(gòu)域蛋白15抗體Human MBP(myelin basic protein) ELISA Kit人性T淋巴相關(guān)抗原4(CTLA-4/CD152)免疫試劑盒
澳型核果褐腐病菌慢性淋巴白血病缺失基因6蛋白抗體Human SOCS4(Suppressor Of Cytokine Signaling 4) ELISA Kit人相關(guān)蛋白A(CagA)抗體(IgG)免疫試劑盒
米曲霉13號(hào)染色體開放閱讀框38抗體Human AA(Arachidonic Acid) ELISA Kit人相關(guān)蛋白A(CagA)免疫試劑盒
白僵菌14號(hào)染色體開放閱讀框140抗體Human VASPIN(Visceral Adipose Specific Serine Protease Inhibitor) ELISA Kit人凋亡相關(guān)斑點(diǎn)樣蛋白(PYCARD)免疫試劑盒
溶壁(lywallzyme)陽(yáng)離子轉(zhuǎn)運(yùn)調(diào)節(jié)樣蛋白2抗體Human VEGF165(Vascular Endothelial Growth Factor165) ELISA Kit人硒結(jié)合蛋白1(SELENBP1)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌15號(hào)染色體開放閱讀框62抗體Human VEGF-B(Vascular Endothelial Cell Growth Factor B) ELISA Kit人硒蛋白P(SEPP1)免疫試劑盒
澳型核果褐腐病菌15號(hào)染色體開放閱讀框41抗體Human VIL1(Villin 1) ELISA Kit人戊型肝炎病抗體(IgM)免疫試劑盒
大腸埃希菌環(huán)核苷陽(yáng)離子通道蛋白α2抗體Human VEGF-D(Vascular Endothelial Growth Factor D) ELISA Kit人戊型肝炎病抗體(IgG)免疫試劑盒
宋氏志賀氏菌鈣連蛋白抗體Human τPK1(Tau-Protein Kinase) ELISA Kit人戊糖(Pentosidine)免疫試劑盒
恥垢分枝桿菌二氫嘧啶相關(guān)蛋白2抗體Human TPA(Tissue Polypeptide Antigen) ELISA Kit人舞蹈病蛋白相互作用蛋白1(HIP1)免疫試劑盒
深綠木霉色P450ⅡE1抗體Human TPS(Tryptase) ELISA Kit人五聚3(PTX3)免疫試劑盒
綠色木霉Trichoderma│viride 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRDickkopf 3試劑盒喹
多粘類芽胞桿菌Paenibacillus│polymyxa 質(zhì)量規(guī)格:BRDickkopf 1試劑盒齊特
頂孢霉屬Acremonium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BCDicer-1 枸橘苷
亞鐵氧化酶(HP)測(cè)試盒100管/96樣葡萄座腔 3-溴-2-基吡啶整合αVβ3Elisa
厚白盤革 6-馬來(lái)酰亞丁酸整合連接激Elisa
黑腐皮殼 2-溴-3--5-酸正常T表達(dá)和分泌因子Elisa
球孢白僵 仲丁基酸脂蛋白aElisa
皺褶青霉 6-溴吡啶-2-酸頻哪酯脂蛋白磷脂A2Elisa
枯草芽孢桿 1,3-苯二酸脂蛋白脂Elisa
麥芽糖假絲酵母 4-正丁基苯酸脂多糖Elisa
大耳霉 4-正丁氧基苯酸脂多糖結(jié)合蛋白Elisa
弗雷德里克斯堡假單胞 4-頻哪酯脂多糖抗體Elisa
黑曲霉 4-(溴甲基)苯酸脂肪甘油三酯脂Elisa
巨型艾耳球蟲 4-(芐氧基羰基)苯酸脂肪Elisa
堆形艾耳球蟲 3-丁氧基苯酸脂肪酸合成Elisa
芽孢桿屬 3-丁氧基苯酸脂肪酸脫氫Elisa
樟疫霉 3-(溴甲基)苯酸脂褐質(zhì)Elisa
蘇云金芽孢桿日本亞種 聯(lián)酸新戊二酯脂聯(lián)Elisa
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。