詳細(xì)介紹
商品屬性:
產(chǎn)品名稱 | |
檢測方法 | 微量法 |
產(chǎn)品規(guī)格 | 100管/96樣 |
產(chǎn)品貨號 | AS6321238 |
商品介紹:
測定意義: SDH(EC 1.1.1.14)催化山梨醇脫氫生成果糖,是調(diào)控生物體內(nèi)山梨醇含量的關(guān)健酶之一。 測定原理: SDH催化山梨醇脫氫生成果糖,同時還原NAD+生成NADH,測定340nm吸光度增加速率可以計算SDH活性。 需自備的儀器和用品: 紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見分光光度計、臺式離心機、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。 NADH的提取:按照血清(漿)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。 NADH的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。 |
ADH測定操作:
1. 分光光度計預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,分別記錄15s和75s時吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,分別記錄15s和75s時吸光值,分別記為A3和A4。△A測定管=A3-A4。
注意:空白管只需測定一次。
注意事項:
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。
姜黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Cefaclor蚓激抗體包裝5g
姜(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Cefradine瘦抗體包裝1g
降二氫辣椒堿英文名: Cefradine瘦受體抗體包裝25g
降香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Ceftizoxime acid瘦受體抗體(長)包裝5g
膠蒼術(shù)甙,羧基蒼術(shù)苷二鹽(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Ceftizoxime acid晚期包膜蛋白1抗體包裝1g
焦地黃乙甙A1英文名: OXYPEUCEDANINHYDRATE富含亮樣性核蛋白抗體包裝25g
焦地黃乙甙B1英文名: AG 490(Tyrphostin B42)晚期包膜蛋白2B抗體包裝5g
焦性沒食子(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Ganoderic acid F脂肪家庭成員K抗體包裝100ml
絞股藍(lán)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Ursodeoxycholic acid白血病相關(guān)蛋白18/癌蛋白18抗體包裝500ml
絞股藍(lán)皂苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Ursodeoxycholic acid無腦回的致病基因LIS1抗體包裝100g
絞股藍(lán)皂苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Cefetamet pivoxil hydrochloride溶體相關(guān)膜蛋白3抗體包裝25g
絞股藍(lán)皂苷XLIX(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Cefetamet pivoxil hydrochloride亮腦啡肽抗體包裝1g
節(jié)裂角茴香(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: L-Biopterin自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈3抗體包裝5g
結(jié)石草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Wortmannin指髕骨綜合征相關(guān)蛋白NPS1抗體包裝250mg
介芬英文名: Neostigmine bromide自噬微管相關(guān)蛋白輕鏈β3抗體包裝100g
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥99.0%,標(biāo)準(zhǔn)品抗染色質(zhì)解旋DNA結(jié)合蛋白4試劑盒風(fēng)信子;2-(1-Ethoxyetho
致病性大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:純度> 99%抗染色體抗體試劑盒覆盆子;4-(4-Hydroxyphe
產(chǎn)黃青霉Penicillium│chrysogenum 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,BR抗縮試劑盒番瀉苷D;Sennoside D
山梨醇脫氫酶(SH)測試盒100管/96樣惡臭假單胞 2-氟半胱蛋白抑制劑;胱抑CElisa
桃色枝頂孢 4-氟天冬蛋白抑制劑Elisa
橘色硬皮馬勃 3-氟S1核酸Elisa
Escherichia 吲唑-3-羧酸刀豆AElisa
馬克斯克魯維酵母 2--4,6-二甲基嘧啶雌二Elisa
磚紅鐮孢 2-氟苯甲基溴孕酮Elisa
豬鏈球 2,4,5-三氟環(huán)腺苷二磷酸核糖Elisa
花蓋紅菇 5-氟脫鎂葉綠a氧化Elisa
膠質(zhì)肉座 (甲氧基)二苯基磷氧谷轉(zhuǎn)氨Elisa
根瘤 甲硫基乙酸乙酯葡聚糖Elisa
阪崎腸桿 2-氟羧甲基賴Elisa
細(xì)鏈格孢 2-環(huán)己基乙多聚半乳糖酸Elisa
木生假絲酵母 2,3-二氫-1,4-苯并二烷-5-羧酸二烯氧化物環(huán)化Elisa
釀酒酵母 3-(4-嗎啉)-1-l2一氧一植物二烯酸還原Elisa
Glaciihabitans 2-氟-6-髓過氧化物Elisa