商品介紹:
測(cè)定意義: AKP/ALP是一種含鋅的糖蛋白酶,在堿性環(huán)境中可水解各種天然及人工合成的磷脂單酯化合物。AKP/ALP廣泛分布于人體各臟器中,以肝臟為主。 測(cè)定原理: 在堿性環(huán)境中,AKP/ALP催化磷酸苯二鈉生成游離酚;酚與4-氨基安替bi林和鐵氰hua鉀反應(yīng)紅色亞醌衍生物,在510nm有特征光吸收;通過(guò)測(cè)定510 nm吸光度增加速率,來(lái)計(jì)算AKP活性。 自備儀器和用品: 紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器和蒸餾水。 |
商品屬性:
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提取:
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:按照血清(漿)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提取:按照組織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
性紅 73(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: *磷化D酪激衰減蛋白1抗體包裝1g
林鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: N-Acetyl Neuraminic Acid/NANA/Neu5Ac/SA磷化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體包裝100g
羧司坦(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Erythromycin磷化D酪激衰減蛋白1抗體包裝500g
他克莫司(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Erythromycin磷化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體包裝100g
他扎羅(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Dobutamine HCL磷化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體包裝25g
標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: HPCD磷化Fas相關(guān)死亡結(jié)構(gòu)域蛋白抗體包裝100ml
(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Carboxymethyl chitosan磷化DNA基轉(zhuǎn)移1抗體包裝500ml
泰諾福韋;韋(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Enoxaparin sodium磷化DNA基轉(zhuǎn)移1抗體包裝100ml
(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Enoxaparin sodium磷化DNA基轉(zhuǎn)移1抗體包裝500ml
坦度替尼(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Trimebutine maleate7脫氫膽固還原抗體包裝1g
碳鈣(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Heparin sodium大腦發(fā)育同源蛋白2抗體包裝5g
糖精(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: HE-β-CD退行性精母同源物1抗體包裝1g
特比萘芬(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Nefopam HClDSCC1蛋白抗體包裝1g
特那定(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Methotrexate disodium 誘捕受體2抗體包裝100g
替比夫定(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Methotrexate disodium DNA基轉(zhuǎn)移相關(guān)蛋白1抗體包裝25g
米曲霉Aspergillus│oryzae 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品尾肢同源蛋白2試劑盒山椒子烯;Zeylenone
: HBUM171309資源名稱: 鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR尾加壓Ⅱ 1,3,5,8-四羥基山;1,3,5,
慢生根瘤菌(豇豆族)Bradyrhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,USP30,BR維生K依賴蛋白Z試劑盒三油甘油酯;Triolein
堿性磷酸酶(AKP/ALP)測(cè)試盒100管/48樣枯草芽孢桿 1-苯基-1,3-丁二酮5-甲基四氫高半胱甲基轉(zhuǎn)移Elisa
綠僵 2,6-二 N-氧化物可提取核抗原Elisa
熱帶假絲酵母 N-甲基-N-苯骨成型蛋白9Elisa
爪哇毛霉 1,4-二甲基吡唑雌馬Elisa
嗜腐爛居真細(xì) 2-(4-羥基苯基)酸透明質(zhì)酸Elisa
茄鏈格孢 1,1,1,3-四烷α酮戊二酸Elisa
周雄腐霉 2-氨基苯并噻唑-6-甲酸母親DPP同源物4Elisa
哈茨木霉 2-對(duì)苯二硫酸鹽視網(wǎng)膜母瘤蛋白1Elisa
水生恩氏 阿德福韋性T相關(guān)抗原Elisa
粉紅單端孢 乙酰肼硫脂Elisa
Homoserinimonas (Z)-N,N-二(2-羥基乙基)-9-十八烯酸??顾枨氏嚓P(guān)糖蛋白抗體Elisa
黃曲霉 2-羥基-4′-(2-羥乙氧基)-2-酮結(jié)締組織活化肽ⅢElisa
枯草芽孢桿 膦?;宜峒柞ザ阴ズ耸荏w亞家族3C組成員1Elisa
芽胞桿屬 8-甲氧基喹啉什曼病Elisa
米根霉 N-(叔丁氧羰基)-D-賴類風(fēng)濕因子IgM抗體Elisa
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。