公司產(chǎn)品僅供科研使用:
商品介紹:
商品介紹 測(cè)定意義: 糖原磷酸化酶(Glycogen phosphorylase,GP,EC 2.4.1.1))是糖原分解代謝的關(guān)鍵酶,使糖原分子從非還原端逐個(gè)斷開(kāi)α-1,4-糖苷鍵移去葡萄糖基,釋放1-磷酸葡萄糖,直至臨近糖原分子α-1,6-糖苷鍵分支點(diǎn)前4個(gè)葡萄糖基處。GP分為有活性的糖原磷酸化酶a(GPa)和無(wú)活性的糖原磷酸化酶b(GPb)兩種形式。GPb在一定濃度的腺苷酸(5,-AMP)存在下可被激活。 測(cè)定原理: GP催化糖原和無(wú)機(jī)磷產(chǎn)生葡萄糖殘基生成糖原和1-磷酸葡萄糖,磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADP還原生成NADPH,在340nm下測(cè)定NADPH上升速率,即可反映GP活性。添加一定濃度的腺苷酸(5,-AMP)時(shí)測(cè)定GP(GPa和GPb)活性,未添加腺苷酸(5,-AMP)時(shí)測(cè)定GPa活性,GP活性-GPa活性得到GPb活性。 需自備的儀器和用品: 紫外分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。 |
常見(jiàn)樣本處理方法:
1、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
2、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備: 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液) ,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次)8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。組織:按照組織質(zhì)量(g) :提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱(chēng)取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡(jiǎn)便:雙試劑,直接操作,快速、簡(jiǎn)便。
2、取樣量微:需要的樣本量是羥胺法的1/10。
3、靈敏度高:檢測(cè)線0.5U/ml,是羥胺法5倍,鄰苯三酚法的200倍
4、穩(wěn)定性好:批內(nèi)CV=5.50%,批間CV=3.32%,試劑盒2~8℃存放3個(gè)月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.2%。6、回收試驗(yàn): X =102.3%。7、受外界影響因素?。焊蓴_因素少,重復(fù)性強(qiáng)。且特異性強(qiáng),不受類(lèi)SOD物質(zhì)的干擾8、測(cè)試面廣:可測(cè)動(dòng)物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
測(cè)定步驟:
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準(zhǔn)確
3.管底加樣,不能加在管壁上
4.加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后,應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后,反應(yīng)的時(shí)間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫高于20℃,ELISA板可避光放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,以便 不時(shí)觀察,待對(duì)照管顯色適當(dāng)時(shí),即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過(guò)程中不是反應(yīng)步驟,但卻 是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒(méi)有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過(guò)程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板
1.陰性對(duì)照顏色極淺,在定性測(cè)定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果,準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法。
副雞嗜血桿菌結(jié)合轉(zhuǎn)化激活因子CITED1抗體Human EPYC(Epiphycan) ELISA Kit人膜內(nèi)?;?ANPEP)免疫試劑盒
蠟樣芽孢桿菌Ⅱ型膠原α1蛋白/軟骨鈣抗體Human EFNA5(Ephrin A5) ELISA Kit人膜聯(lián)蛋白A2(ANXA2/ANX2/ANX2L4/CAL1H/LPC2D)抗體免疫試劑盒
耐輻射奇球菌CSMD2蛋白抗體Human ERα(Estrogen Receptor Alpha) ELISA Kit人膜聯(lián)蛋白Ⅶ(ANX-Ⅶ)免疫試劑盒
阿華蠟孔菌CSMD3蛋白抗體Human EFNA4(Ephrin A4) ELISA Kit人膜聯(lián)蛋白Ⅵ(ANX-Ⅵ)免疫試劑盒
金耳鈣調(diào)神經(jīng)磷CSTP1抗體Human ERK1(Extracellular Signal Regulated Kinase 1) ELISA Kit人膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)抗體(IgM)免疫試劑盒
釀酒酵母CTAGE6蛋白抗體Human EL/LIPG(Endothelial Lipase) ELISA Kit人膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)抗體(IgG)免疫試劑盒
苔原彎頸霉皮膚T淋巴瘤相關(guān)抗原4抗體Human EFNA5(Ephrin A5) ELISA Kit人膜聯(lián)蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)免疫試劑盒
葛氏沙雷氏菌膜蛋白CLDND2抗體Human ELA2B(Elastase 2B) ELISA Kit人膜聯(lián)蛋白Ⅳ(ANX-Ⅳ)免疫試劑盒
膠紅酵母含半胱和組豐富域蛋白1抗體Human Des(Desmin) ELISA Kit人膜聯(lián)蛋白Ⅲ(ANX-Ⅲ)免疫試劑盒
嗜熱假諾氏菌豬圓環(huán)病Ⅱ型衣殼蛋白Human ELA3B(Elastase 3B) ELISA Kit人膜聯(lián)蛋白Ⅱ(ANX-Ⅱ)免疫試劑盒
大豆慢生根瘤菌抗菌肽CAMP抗體Human DHEA-S(Dehydroepiandrosterone Sulfate) ELISA Kit人膜聯(lián)蛋白Ⅰ(ANX-Ⅰ)免疫試劑盒
釀酒酵母卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白134抗體Human DPD(Deoxypyridinoline) ELISA Kit人膜結(jié)合型IgM(mIgM)免疫試劑盒
人蒼白桿菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白69抗體Human DPT(Dermatopontin) ELISA Kit人膜攻擊復(fù)合物(MAC)免疫試劑盒
節(jié)桿菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白98抗體Human DPP6(Dipeptidyl Peptidase VI) ELISA Kit人膜輔蛋白(MCP/CD46)免疫試劑盒
紅細(xì)菌卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白70抗體Human DLD(Dihydrolipoyl Dehydrogenase) ELISA Kit人繆勒管抑制物質(zhì)/抗繆勒管激(AMH)免疫試劑盒
鐮孢霉卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白51抗體Human DR-70TM(Tumor Marker DR-70 For Lung Cancer) ELISA Kit人苗條受體(LR/Ob-R)免疫試劑盒
蟲(chóng)擬蠟菌Ceriporiopsis│subvermispora 質(zhì)量規(guī)格:D,99.96%Alpha-D /維生E試劑盒橙黃Ⅱ
輪枝菌Verticillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:D,99.9%alpha-1腎上腺能受體試劑盒橙黃Ⅰ
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格:D,99.9%AFG3樣蛋白2試劑盒雌
糖原磷酸化酶b(GPb)測(cè)試盒50管/24樣詹氏酸桿 托法替尼8-氧鳥(niǎo)脫氧核苷Elisa
無(wú)藥品 需氧總數(shù) 3--5-(三氟甲基)苯甲波形蛋白Elisa
釀酒酵母 7-甲基-3-甲鳥(niǎo)氨酰轉(zhuǎn)移Elisa
Maribius salinus 6-甲基-3-甲肌間線蛋白Elisa
雞傷寒沙門(mén)氏 4-硝基甘油-3-磷酸脫氫Elisa
大腸埃希氏 6-硝基堿性成纖維生長(zhǎng)因子2Elisa
釀酒酵母 N-叔丁氧羰基-O-(2-溴芐氧羰基)-L-酪輔脂Elisa
斯托克青霉 1-Boc-3-基吡咯烷脯氨酰羥化Elisa
雙歧雙歧桿 Isotretinoin心血管調(diào)節(jié)肽Salusin-α抗體Elisa
梅氏弧 4-二甲氨基苯甲酰心血管調(diào)節(jié)肽Salusin-β抗體Elisa
總狀共頭霉 1,4-二酞纖維蛋白原γ鏈Elisa
果生鏈核盤(pán) Sorafenib Tosylate一氧化氮合Elisa
纖維単胞 N-Boc-5-溴-2-酸抗中性粒核周抗體Elisa
阿姆斯特丹曲霉 (S)-3-羥基鹽酸鹽白三烯E4Elisa
腐皮鐮孢 4-乙基苯甲抗小腸杯狀抗體Elisa
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱(chēng)取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱(chēng)之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。