EDTA細胞消化液

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產(chǎn)品分類：細胞培養(yǎng)

儲存條件  室溫,12個月

用途  細胞消化液的一種，含有pbs和edta,不含胰蛋白酶,對細胞損傷較小。

注意事項  無菌溶液。

 

 

配制與標(biāo)定的實驗原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實驗方法與判定：

1.對照品溶液的穩(wěn)定性

2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細管柱；柱溫120℃；進樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應(yīng)不低于10000。

4.實驗方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

β萘(β-Nph)β-Nph ELISA Kit絲狀肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體包裝100g

β萘(β-naphthol)β-naphthol ELISA Kit抗凝血3抗體包裝25g

β連環(huán)蛋白/聯(lián)蛋白(β-Cat)β-Cat ELISA Kit人血清白蛋白單克抗體包裝5g

β干擾(IFN-β/IFNB)IFN-β/IFNB ELISA Kit載脂蛋白A4抗體包裝1g

β干擾(IFNβ)IFNβ ELISA Kit磷化Rho鳥苷交換因子2抗體包裝25g

β甘露糖苷(β Manase)β Manase ELISA Kit磷化絲狀肌動蛋白結(jié)合蛋白抗體包裝5g

β-防御3(β-BD-3)β-BD-3 ELISA Kit肌動蛋白相關(guān)蛋白2/3亞型1A抗體包裝250mg

β防御2(β-BD-2)β-BD-2 ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白32抗體包裝1g

β-防御1(β-BD-1)β-BD-1 ELISA Kit共濟失調(diào)7樣蛋白3B抗體包裝5g

β-防御(β-DF)β-DF ELISA Kit感染性蛋白蛋白1抗體包裝1g

β防御(β-Defensin)β-Defensin ELISA Kit含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號抑制物盒蛋白家族5抗體包裝5g

β淀粉樣蛋白1-42(Aβ1-42)Aβ1-42 ELISA Kit植物生長激ABP1抗體包裝100g

β淀粉樣蛋白1-40(Aβ1-40)Aβ1-40 ELISA Kit磷化活化復(fù)制因子2抗體包裝25g

β半乳糖苷(βGAL)βGAL ELISA Kitalpha 1腎上腺能受體B抗體包裝5g

β基己糖苷A(β-Hex A)β-Hex A ELISA KitBcl2 alpha蛋白抗體包裝100mg

磷化鈉ATP蛋白a1抗體趨化因子C-C-基元配體4樣蛋白1(CCL4L1)SRPIN340 is a selective SRPK inhibitor with Ki of 0.89 μM for SRPK1, showing no
EDTA細胞消化液DTNBP1 /FITC  熒光標(biāo)記精神分裂癥易感因IgG環(huán)己酮 99.8%

dUTPase/FITC  熒光標(biāo)記抗脫氧三核水解IgGN,N-二酰  ≥99.8%

DVL1 /FITC  熒光標(biāo)記蓬亂蛋白1IgG鄰二苯  98%

DVH/FITC  熒光標(biāo)記鴨病性肝炎IgG二 AR,99.0%

FLAG Tag (NT)/FITC  熒光標(biāo)記抗標(biāo)簽FLAG Tag標(biāo)簽（N端）IgG二水溶液 AR,40 wt. % in H2O

K3/FITC  熒光標(biāo)記抗K3蛋白IgG二 Standard for GC,≥99.9% (GC)

FLAG Tag (CT)/FITC  熒光標(biāo)記FLAG Tag標(biāo)簽（C端）IgG二 AR,99.5%,含50-150ppm異戊烯穩(wěn)定劑

FLAG Tag (CT)/HRP  辣根過氧化物標(biāo)記 FLAG Tag標(biāo)簽（C端）IgG二 CP,99.0%

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實驗體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動物細胞50-500μg/mL；細菌/植物細胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達目的蛋白的細胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實現(xiàn)，至少選擇5個濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細胞按照20-25%的細胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。

4）  接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進行活細胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當(dāng)細胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細胞稀釋至豐度不超過25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評估細胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。