試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
商品介紹:
測(cè)定意義:土壤磷酸酶是催化土壤有機(jī)磷化合物礦化的酶,其活性的高低直接影響著土壤中有機(jī)磷的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性,是評(píng)價(jià)土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強(qiáng)度的指標(biāo)。磷酸酶活性受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH的顯著影響,根據(jù)最適PH范圍,一般把土壤磷酸酶分為中性、酸性和堿性三種類型。測(cè)定原理:中性環(huán)境中,S-NP催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉,通過測(cè)定酚的生成量即可計(jì)算出NP活性。需自備的儀器和用品:可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、37℃恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿、冰、蒸餾水、500ml試劑瓶、96%乙醇和甲苯。 |
商品屬性:
NAD+和NADH的提取:
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取:按照血清(漿)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提取:按照組織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提取: NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
1,4,7-三基哌啶-1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二...英文名: Coronene一種腫瘤抑制基因抗體(N端)包裝5g
1-(6-Chloro-9H-咔唑-2-yl)乙?;?...英文名: Coronene (purified by sublimation)腺苷單磷活化蛋白激α1/AMPK α 1抗體包裝1g
1-β-D-呋核亞硝尿-1,2,4-三唑-3-羧酯英文名: Corannulene維生K依賴的蛋白C重鏈抗體包裝5g
1-含氧的英文名: 2,5-Diphenyl-1,3,4-oxadiazole神經(jīng)叢蛋白A1抗體包裝1g
1-基-煙?;镉⑽拿?2,5-Di(1-naphthyl)-1,3,4-oxadiazolep21激活激4抗體包裝25g
1-基英文名: 9,10-Di(1-naphthyl)anthracene磷化p21激活激4/5/6抗體包裝5g
1-基吲唑-3-羧(格司瓊雜質(zhì)D)英文名: 2,3,6,7,10,11-Hexakis(hexyloxy)triphenylene磷化p21激活激1/2抗體包裝100ml
1-萘乙酰精三鹽英文名: Perylene磷化p21激活激1/2抗體包裝25ml
1-羥基(雜質(zhì)))(對(duì)映異構(gòu)體混合物)英文名: Perylene (purified by sublimation)磷化p21激活激2抗體包裝5ml
1-去 2-基格司瓊(格司瓊雜質(zhì)A)英文名: 1,1,4,4-Tetraphenyl-1,3-butadiene磷酯Cγ2抗體包裝10g
1-去 格司瓊(格司瓊雜質(zhì)B)英文名: Triphenylene磷化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-α抗體包裝50g
1-月桂酰-3-英文名: meso-Tetraphenylchlorin磷化血小板源性生長(zhǎng)因子受體-α抗體包裝100g
10-反式-阿托伐他(阿托伐他雜質(zhì)AT10)((3...英文名: Tetraphenylporphyrin (Chlorin free)P73腫瘤抑制基因抗體包裝25g
10-反式-阿托伐他縮合物叔丁基酯英文名: 2,4,6-Triphenyl-1,3,5-triazine表觀抑制因子Polycomb家族成員PCGFl蛋白抗體包裝25g
10-羥基(對(duì)映異構(gòu)體混合物)英文名: 1,3-Diphenyl-1,3-propanedioneG蛋白偶聯(lián)受體p2y10抗體包裝5g
泡盛曲霉Aspergillus│awamori 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品過氧化試劑盒低聚果糖-蔗果五糖;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證
桔灰青霉Penicillium│aurantiogriseum 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BRS轉(zhuǎn)移TT試劑盒低聚果糖-蔗果四糖;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證
副豬嗜血桿菌Haemophilus│parasuis 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,S構(gòu)型,標(biāo)準(zhǔn)品試劑盒低聚果糖-蔗果三糖;純品型;標(biāo)準(zhǔn)品;有證
土壤中性磷酸酶(SNP)測(cè)試盒50管/48樣亞銹褐褶 6-溴-2,3-二氮雜萘酮活躍腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子Elisa
大腸埃希 5-甲氧基-2-甲基-3-乙酸甲酯α1微球蛋白Elisa
球孢白僵 1-Boc-母親DPP同源物4Elisa
Taibaiella 2,2-二甲基-1-視網(wǎng)膜母瘤蛋白1Elisa
達(dá)班湖喜鹽芽孢桿 1-甲基-3-甲脫腳病病Elisa
紅球 2--4-基嘧啶單核趨化蛋白2Elisa
米根霉 2,3,5-三溴吡啶白三烯E4Elisa
葉點(diǎn)霉屬 2-溴-3--5-(三氟甲基)吡啶Wnt-16蛋白Elisa
塔賓曲霉 5-溴-3--7-氮雜神經(jīng)酪激受體1Elisa
矮小青霉 3-氟-5-吡啶神經(jīng)酪激受體2Elisa
發(fā)酵畢赤酵母 8--5-氨基喹啉腫瘤壞死因子受體超家族成員1BElisa
香菇 3-氨基異膠原吡啶交聯(lián)Elisa
枯草芽孢桿 十二烷基二苯二磺酸鈉TAU-1蛋白Elisa
芽胞桿 來氟洛米TAU-5蛋白Elisa
皺紋假單胞 (2-甲氧基-5-)乙酸白血病病抗體Elisa