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公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購！
產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 貨號 |
DNA退火緩沖液 | 1ml | FS-R7409 |
產(chǎn)品分類：PCR相關(guān)
儲存條件：—20℃,12個月
用途：用于DNA oligo退火的緩沖液
注意事項：無菌溶液。主要由乙酸鉀、HEPES等組成,經(jīng)無菌處理。
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；
EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。
配制步驟：
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來水、純水洗凈，烘干、冷卻。
2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。
實(shí)驗(yàn)方法與判定：
1.對照品溶液的穩(wěn)定性
2.對照品溶液的配制：精密量取腦對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對照品溶液。
3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計算應(yīng)不低于10000。
4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對照品溶液，三種儲備液同時稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對照品的峰面積計算原對照品溶液的含量。記錄下來，保證原對照品溶液含量在考察期相對平均偏差不超過2.0%，驗(yàn)證對照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
粘著劍菌線粒體鈉/氫交換蛋白質(zhì)2抗體Human CEBPD(CCAAT/enhancer Binding Protein(C/EBP), delta) ELISA Kit人抗紅抗體(RBC)
喇叭菌神經(jīng)元1抗體Human BAX(Apoptosis regulator BAX) ELISA Kit人抗核周因子抗體(APF)
豆芽菌1-2神經(jīng)肽Y抗體Human MAPK1(Mitogen-activated protein kinase 1) ELISA Kit人抗核小體抗體IgG(AnuA-IgG)
枯草芽孢桿菌神經(jīng)營養(yǎng)因子抗體Human CTLA4(Cytotoxic T-lymphocyte protein 4) ELISA Kit人抗核糖體P蛋白抗體(ARPA/Rib-P)
球孢白僵菌谷受體2B抗體Human CEACAM1(Carcinoembryonic antigen-related cell adhesion molecule 1) ELISA Kit人抗核糖核蛋白抗體(RNP-Ab)
單胞菌屬神經(jīng)纖毛蛋白2抗體Human C9(Complement component C9) ELISA Kit人抗核仁纖維蛋白抗體(AFA/snoRNP/U3RNP)
枯斑擬盤多毛孢谷受體2D抗體Human BCL11B(B-cell lymphoma/leukemia 11B) ELISA Kit人抗核仁抗體(ANA)
香栓孔菌原癌基因N-Ras抗體Human CCL28(C-C motif chemokine 28) ELISA Kit人抗核膜糖蛋白210抗體(gp210)
耐鹽考克氏菌T激活核轉(zhuǎn)錄因子4抗體Human NPS(Neuropeptide S) ELISA Kit人抗核抗體(ANA)
地下鹽單胞菌腦低密度脂蛋白受體蛋白1抗體Human GSK3β(Glycogen synthase kinase-3 beta) ELISA Kit人抗骨骼肌抗體(ASA)
蘇云金芽孢桿菌軸突蛋白2抗體Human CD28(T-cell-specific surface glycoprotein CD28) ELISA Kit人抗弓形體IgM抗體(anti-tox IgM)
殼菌腎小球粘附分子受體抗體Human APOA2(Apolipoprotein A-II) ELISA Kit人抗高爾基體抗體(AGAA)
變粉紅鎖擲孢酵母神經(jīng)生長調(diào)節(jié)蛋白1抗體Human CD276(CD276 antigen) ELISA Kit人抗肝膜抗體(LMA)
污黑腐皮殼軸突生長誘向因子G2抗體Human CTSL2(Cathepsin L2) ELISA Kit人抗肝胞質(zhì)1型抗體(LC1)
類干酪乳桿菌黑色瘤硫軟骨蛋白多糖4抗體Human COR(Cortisol) ELISA Kit人抗肝特異性脂蛋白抗體(LSP)
NDST1蛋白抗體Human GSK3β(Glycogen synthase kinase-3 beta) ELISA Kit人抗肝PF4復(fù)合物抗體/HIT抗體-IgM(HIT)
彎曲芽孢桿菌Bacillus│flexus 質(zhì)量規(guī)格：>250U/mg,BR苦杏仁苷
芽孢桿菌屬Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>2500U/MG絞股藍(lán)皂苷
雅致放射毛霉Actinomucor│elegans 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR金絲桃
DNA退火緩沖液Alpha2-AP(Mouse Alpha2-Antiplasmin) ELISA Kit 小鼠α2抗纖溶mei規(guī)格： 48T
Alpha2-PI(Mouse Alpha2-plasmin inhititor) ELISA Kit 小鼠α2纖溶mei抑制物規(guī)格： 48T
Ub(Mouse Ubiquitin) ELISA Kit 小鼠泛su蛋白規(guī)格： 48T
IDUA(Mouse Alpha-L-iduronidase) ELISA Kit 小鼠αL艾杜糖suanmei規(guī)格： 48T
AlphaNAG(Mouse AlphaN-acetylglucosaminidase) ELISA Kit 小鼠αN已酰氨基葡糖mei規(guī)格： 48T
使用方法：
1. 常用篩選濃度
注意：用來篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類型，培養(yǎng)基，生長條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來確定最佳篩選濃度。
一般而言，哺乳動物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個濃度。
1） 第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過夜；注：對于需要更高密度來檢測活力的細(xì)胞，可增加接種量。
2） 根據(jù)細(xì)胞類型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3） 第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個濃度做三個平行孔。
4） 接下來每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5） 按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計數(shù)來確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1） 轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。
注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過于稠密，其效率會降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過25%
2） 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3） 篩選7天后觀察并評估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時間，這取決于宿主細(xì)胞類型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。
4） 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5） 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。
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