商品屬性:
商品介紹:
測(cè)定意義哺乳動(dòng)物CarE,也稱脂族酯酶(aliesterase),廣泛分布于組織和器官,屬于絲氨酸水解酶家族。CarE催化含酯鍵、酰胺鍵和硫酯鍵的內(nèi)源性與外源性物質(zhì)水解,但不能催化水解乙酰膽堿及其類似物。CarE參與脂質(zhì)運(yùn)輸和代謝,并且與多種藥物、環(huán)境毒物以及致癌物的解毒和代謝有關(guān),有機(jī)磷農(nóng)藥可結(jié)合并且抑制CarE活性。測(cè)定原理CarE能催化乙酸-1-萘酯生成萘酯,通過(guò)測(cè)定萘酯的生成速率即可計(jì)算出CarE的活性。實(shí)驗(yàn)中所需儀器及設(shè)備可見(jiàn)分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1ml玻璃比色皿、雙蒸水和無(wú)水乙醇。 |
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取:按照血清(漿)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提取: NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
頭孢匹林鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: GeniposideDYX1C1蛋白抗體包裝5g
頭孢羥芐 (標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: GeniposideE3泛蛋白連接dzip3抗體包裝1g
頭孢曲松鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: 17-Methyltestosterone三磷腺苷依賴解旋DDX23抗體包裝250mg
頭孢噻吩(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Tetrahydro-L-Biopterin free base多能發(fā)育相關(guān)基因5抗體包裝5g
頭孢噻呋鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Tirofiban HCl三磷腺苷依賴解旋DDX3抗體包裝100mg
頭孢噻肟鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Tirofiban HCl磷化三磷腺苷依賴解旋DDX3抗體包裝1g
頭孢妥侖匹酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Pullulan迪格弗-梅爾基奧爾-克勞森綜合征相關(guān)蛋白抗體包裝500mg
頭孢西丁鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Vitamin E,dl-α-tocopherol雙氧化激活因子2抗體包裝5g
頭孢西?。^孢西?。?biāo)準(zhǔn)品)英文名: StavudineRNA結(jié)合泛連接DZIP3抗體包裝100mg
頭孢唑啉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Stavudine二氫二脫氫1/2抗體包裝500mg
頭孢唑啉鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Moclobemide形態(tài)發(fā)生紊亂關(guān)聯(lián)激活因子2抗體包裝1g
頭孢唑肟(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Moclobemide質(zhì)分裂付出蛋白2抗體包裝5g
頭孢唑肟鈉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Astragaloside IV質(zhì)分裂付出蛋白4抗體包裝1g
土霉A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Astragaloside IV質(zhì)分裂付出蛋白5抗體包裝250mg
褪黑,松果體(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Nateglinide淋巴抗原75抗體包裝50ml
: D8(1957)資源名稱: 傷寒沙門氏菌 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR維生D2試劑盒四氫小檗堿;Tetrahydroberb
大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品維生C試劑盒蘇木;Hematoxylin
膠孢刺盤孢Colletotrichum│gloeosporioides 質(zhì)量規(guī)格:>98.5%,USP,可用于培養(yǎng)維生B6試劑盒雙醋瑞因;1,8-Diacetoxy-3
羧酸酯酶(CarE)測(cè)試盒50管/48樣豬丹絲 3-苯酮狀瘤病16型Elisa
卵孢木霉 異丁酸肉桂酯狀瘤病18型Elisa
蠟狀芽孢桿 丁酸苯乙酯鐵過(guò)氧化物岐化Elisa
聚生殼 2-氨基嘧啶-5-酸前血小板堿性蛋白Elisa
伊平屋橋大洋芽孢桿 3-叔丁基己二酸泛蛋白連接E3成分N-識(shí)別蛋白1Elisa
頂青霉 鄰甲基肉桂肝生長(zhǎng)因子受體Elisa
耐久腸球 4'-溴苯酮拓?fù)洚悩?gòu)ⅡElisa
豇豆慢生根瘤 丁酸芐酯抗新喋呤抗體Elisa
硫磺 2-甲基-3-吡咯甲酸乙酯硫酸角質(zhì)Elisa
根瘤 異丁酸苯甲酯親核α2Elisa
Leminorella richardii 2-溴-4-DNAⅠ樣蛋白3Elisa
硝孢鏈霉 4-甲砜基苯乙酮Sorbin和含SH3結(jié)構(gòu)域的蛋白2Elisa
色串孢屬 高酸銅(II)六水合物增殖誘導(dǎo)配體Elisa
噬尼古丁節(jié)桿 水楊酰肼肽抑制劑16Elisa
直立枝孢 左乙西坦抑癌基因Beclin1Elisa