試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
商品介紹:
測(cè)定意義蛋白質(zhì)含有三種含硫氨基酸:甲硫氨酸、胱氨酸和Cys。其中,Cys是一種含有巰基的含硫氨基酸,從甲硫氨酸轉(zhuǎn)化而來,并且可與胱氨酸互相轉(zhuǎn)化。Cys參與蛋白質(zhì)二硫鍵的形成,經(jīng)常是蛋白質(zhì)活性中心的組成部分,還可以為其它生理生化反應(yīng)提供巰基。此外,Cys大量積聚在皮膚和粘膜表面,在角蛋白生成中維持重要的琉基酶的活性,并且補(bǔ)充硫基,以維持皮膚的正常代謝,調(diào)節(jié)表皮最下層的色素細(xì)胞生成的底層黑色素。具有美白、解毒、改善炎癥和過敏性皮膚等作用。測(cè)定原理半胱氨酸與磷鎢酸反應(yīng),可將磷鎢酸還原成鎢藍(lán),在600nm處有吸收峰,通過測(cè)定鎢藍(lán)的生成量,即可計(jì)算出半胱氨酸含量。實(shí)驗(yàn)中所需儀器及設(shè)備可見分光光度計(jì)、低溫離心機(jī)、掌上離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、1ml玻璃比色皿、雙蒸水 |
商品屬性:
NAD+和NADH的提取:
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提取:按照組織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提取: NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4。△A測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
萘乙酰(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Oxcarbazepine補(bǔ)體C4b-A蛋白抗體包裝100mg
尼泊金酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Oxcarbazepine磷化整合β2/Integrin β2抗體包裝1g
尼泊金酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Hypericin磷化整合β2/Integrin β2抗體包裝5g
尼泊金乙酯;羥乙酯(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: D-(+)-Glucopyranose 6-phosphate4號(hào)染色體開放閱讀框28抗體包裝100g
尼爾雌(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: D-Gluconate 6-phosphate 3sodium salt 陽離子通道相關(guān)蛋白2抗體包裝25g
尼可地爾(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Azathioprine陽離子通道相關(guān)蛋白3抗體包裝5g
尼可占替諾(煙占替諾)標(biāo)準(zhǔn)品英文名: Barnidipine HCl液泡蛋白分選蛋白VPS13A抗體包裝1g
尼羅替尼(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Cefepime Hydrochloride鈣調(diào)磷B相關(guān)蛋白2抗體包裝1g
尼麥角林(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Cefepime HydrochlorideCHRAC1蛋白抗體包裝5g
尼舒(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Loxoprofen sodiumATP依賴的解螺旋抗體包裝1g
尼莫地平(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Loxoprofen sodiumX染色體開放閱讀框6抗體包裝5g
尼莫地平雜質(zhì)Ⅰ/2,6-二基-4-(3-基)-...英文名: Paeonol硫軟骨2抗體包裝1g
尼群地平(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Paeonol碳化合物磺基轉(zhuǎn)移10抗體包裝5g
尼群地平雜質(zhì)A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Rotundine/ L-Tetrahydropalmatine碳化合物磺基轉(zhuǎn)移11抗體包裝1g
尼索地平(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Liranaftate碳化合物磺基轉(zhuǎn)移12抗體包裝250g
根瘤菌Rhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品間粘附分子2試劑盒絲石竹皂苷元3-O-B-D葡萄糖酯
香菇Lentinula│edodes 質(zhì)量規(guī)格:>99%,EP5.0間粘附分子1試劑盒L-鼠李糖;L(+)-Rhamnose
CBS277.70=ATCC22054資源名稱: 森正青霉 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品性T淋巴相關(guān)抗原4試劑盒松香;Abietic Acid
半胱氨酸(Cys)含量測(cè)試盒50管/48樣粗毛假蜜環(huán) N,N-二甲基-1-十四烷基乳酸脫氫5Elisa
釀酒酵母 5-氨基異喹啉輪狀病IgA抗體Elisa
阿達(dá)青霉 2,6,6-基-2-環(huán)己烯-1,脊髓灰質(zhì)炎病IgA抗體Elisa
煙曲霉 N-亞磺酰苯肺炎支原體Elisa
成晶節(jié)桿 N,N-二甲基十二烷基腮腺炎病抗體Elisa
隆德假單胞 4-甲基噠骨膜蛋白Elisa
噬果膠黃桿 N N'-二乙基乙二IgG抗體Elisa
大腸埃希氏 2-溴-3-氟苯IgM抗體Elisa
鴨疫里默氏桿 一縮二鼻病IgG抗體Elisa
天麻萌發(fā)8103號(hào)* 丁酸正辛酯鼻病IgM抗體Elisa
白地霉 3-嗎啉酮層連蛋白β1Elisa
卷枝毛霉灰藍(lán)變型 4,6-二甲基-2-羥基嘧啶層連蛋白β2Elisa
大腸埃希氏 4-N-叔丁氧羰基-4-N-甲基氨基層連蛋白β3Elisa
發(fā)酵乳桿 苯甲二甲基腙層連蛋白γ2Elisa
巴西曲霉 基巰基-4-氨基-6-羥基嘧啶腺病IgG抗體Elisa