商品屬性:
商品介紹:
測(cè)定意義:多聚半乳糖醛酸酶(EC3.2.1.15)是一種細(xì)胞壁結(jié)合蛋白,可以催化果膠分子中α-(1,4)-聚半乳糖醛酸的裂解,參與果膠的降解,使細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)解體,導(dǎo)致果實(shí)軟化,與果實(shí)成熟、葉和花的脫落、病原物防御,細(xì)胞伸展發(fā)育以及木質(zhì)化有關(guān),在植物抗病性和食品貯藏保鮮領(lǐng)域具有較高的研究?jī)r(jià)值。測(cè)定原理:多聚半乳糖醛酸酶水解果膠酸生成半乳糖醛酸,具有還原性醛基,與DNS試劑反應(yīng)生成紅棕色物質(zhì),在540nm有特征吸收峰,測(cè)定540nm處吸光值變化可計(jì)算得多聚半乳糖醛酸酶活性。 |
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取:按照血清(漿)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提取:按照組織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
白靈菇c-mer原癌基因酪激抗體Human GDF2(Growth/differentiation factor 2) ELISA Kit人甘露糖(Mannose)免疫試劑盒
假單胞菌Ⅱ型膠原α1蛋白/軟骨鈣抗體Human OSMR(Oncostatin-M-specific receptor subunit beta) ELISA Kit人甘露聚糖結(jié)合凝集絲肽1(C4/C2 RA反應(yīng)因子的激活因子)(MASP1)免疫試劑盒
殼囊孢屬Ⅲ型膠原蛋白/膠原蛋白3/3型膠原蛋白抗體Human OIT3(Oncoprotein-induced transcript 3 protein) ELISA Kit人甘膽(CG)免疫試劑盒
大腸埃希菌IV型膠原蛋白/4型膠原蛋白/膠原蛋白4抗體Human DEFA5(Defensin Alpha 5, Paneth Cell Specific) ELISA Kit人甘免疫試劑盒
大腸埃希氏菌前列腺氧化環(huán)化1抗體Human CTSG(Cathepsin G) ELISA Kit人干因子受體(SCFR)免疫試劑盒
匍枝根霉(黑根霉)Ⅰ型膠原抗體Human PRKAB1(5′-AMP-activated protein kinase subunit beta-1) ELISA Kit人干因子/肥大生長(zhǎng)因子(SCF/MGF)免疫試劑盒
解烴棒桿菌Ⅴ型膠原抗體Human GNRHR(Gonadotropin-releasing hormone receptor) ELISA Kit人干擾誘導(dǎo)跨膜蛋白1(IFITM1/CD225/IFI17)免疫試劑盒
草假單胞菌Ⅹ型膠原抗體Human MCAM(Cell surface glycoprotein MUC18) ELISA Kit人干擾誘導(dǎo)蛋白10(IP-10/CXCL10)免疫試劑盒
釀酒酵母周期F抗體Human DEFA1(Defensin Alpha 1, Neutrophil) ELISA Kit人干擾誘導(dǎo)T趨化因子(ITAC/CXCL11)免疫試劑盒
橙色土地桿菌泛連接CUL7蛋白抗體Human CCR7(C-C chemokine receptor type 7) ELISA Kit人干擾活化基因205(Ifi205)免疫試劑盒
球毛殼甲狀腺受體相互作用蛋白15抗體Human CSNK2B(Casein kinase II subunit beta) ELISA Kit人干擾調(diào)節(jié)因子8(IRF8)免疫試劑盒
大腸埃希氏菌信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基6抗體Human MSTN(Growth/differentiation factor 8) ELISA Kit人干擾調(diào)節(jié)因子3(IRF3)免疫試劑盒
香菇信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白亞基4抗體Human SFRP4(Secreted frizzled-related protein 4) ELISA Kit人干擾a-抗體(Anti-IFN-ab)免疫試劑盒
枯草芽胞桿菌心肌肌鈣蛋白抗體Human SLC25A20(Mitochondrial carnitine/acylcarnitine carrier protein) ELISA Kit人鈣轉(zhuǎn)運(yùn)ATP2C型成員1(ATP2C1)免疫試劑盒
淺金鏈霉菌CAP1抗體Human ETFβ(Electron transfer flavoprotein subunit beta) ELISA Kit人鈣粘蛋白相關(guān)的神經(jīng)受體1(CNR-1)免疫試劑盒
米曲霉粒-巨噬集落激因子3抗體Human NEBL(Nebulette) ELISA Kit人鈣依賴性胞漿型磷脂A2(iPLA2)免疫試劑盒
柱狀田頭菇(茶樹菇、楊樹菇)Agrocybe│cylindracae 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,98.5%羥基茜草
: IFFI2335資源名稱: 黑曲霉 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%細(xì)辛脂
豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌Actinobacillus│Pleuropneumoniae 質(zhì)量規(guī)格:分析標(biāo)準(zhǔn)品古倫賓
多聚半乳糖醛酸酶(PG)測(cè)試盒50管/24樣Pseudomonas extremaustralis 3,6-二溴-9-乙基咔唑色P450亞型3AElisa
淺白隱球酵母 2-羥基-5-三氟組蛋白乙?;疎lisa
釀酒酵母 2-氨基-4-乙基吡啶微囊藻Elisa
彩色豆馬勃 2-硝基-4-吡啶甲酸甲硫腦啡肽Elisa
乙型溶血性鏈球 甘氨酰-L-苯Runt相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子2Elisa
蘇云金芽孢桿 5,5-二甲基-1-吡咯啉-N-氧化物Coll2-1NO2Elisa
溶桿 (3-氟苯甲酰)乙酸乙酯纖維蛋白3-3Elisa
赭綠青霉 3-氟-4-甲氧基芐基溴α7煙堿型乙酰受體抗體Elisa
花臉蘑 10-羥基苯并[ h] 喹啉環(huán)指蛋白5抗體Elisa
釀酒酵母 DL-叔亮2,5寡腺苷酸合成Elisa
哈茨木霉 雙甲脒輪狀病IgA抗體Elisa
Melanconis 雙甲脒血小板衍生生長(zhǎng)因子Elisa
鹽地喜鹽芽孢桿 阿伐那成纖維生長(zhǎng)因子Elisa
異常畢赤酵母 多肽試劑TCTUElisa
釀酒酵母 N'-Cbz-L-鳥UDP葡萄糖酸轉(zhuǎn)移2家族多肽B1Elisa