商品屬性:
商品介紹:
測(cè)定意義 NADK(EC 2.7.1.23)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,是目前所發(fā)現(xiàn)的生物體內(nèi)惟一能夠催化NAD+磷酸化生成NADP+的酶,可催化NAD(H)以ATP或無(wú)機(jī)多聚磷酸[poly(P)]作為磷?;w進(jìn)行磷酸化反應(yīng),生成NADP(H)。因此,NAD激酶在合成NADP(H)以及調(diào)節(jié)NAD(H)與NADP(H)的平衡上具有重要作用。 測(cè)定原理 NADK催化NAD+磷酸化,生成NADP+;NADP+可被6-磷酸葡萄糖脫氫酶還原為NADPH;NADPH通過(guò)PMS的遞氫作用,還原氧化型噻唑藍(lán)(MTT),通過(guò)在600 nm下測(cè)定MTT的還原速度(吸光值的變化)可反映出NADK活性的大小。 需自備的儀器和用品 可見(jiàn)分光光度計(jì)、恒溫水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL玻璃比色皿和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提取:按照血清(漿)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提取: NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
粘蛋白/粘液1(MUC1)英文名:MUC1 ELISA Kit血管生成相關(guān)蛋白6抗體包裝1g
再生基因蛋白1a(REG-1a)英文名:REG-1a ELISA KitMuellerian繆勒管激抑制因子抗體包裝5g
載脂蛋白H(Apo-H)英文名:Apo-H ELISA Kit酪蛋白激受體A8抗體包裝1g
載脂蛋白E(Apo-E)英文名:Apo-E ELISA Kit脂肪酰家族成員1抗體包裝5g
載脂蛋白B48(apo-B48)英文名:apo-B48 ELISA Kit芳香烴受體核轉(zhuǎn)錄蛋白樣2抗體包裝100mg
載脂蛋白B100(apo-B100)英文名:apo-B100 ELISA Kit磷化芳香N-乙?;D(zhuǎn)移抗體包裝1g
載脂蛋白B100(Apo B100)英文名:Apo B100 ELISA Kit肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白1抗體包裝500mg
載脂蛋白B(ApoB)英文名:ApoB ELISA Kit粘附分子IgG樣結(jié)構(gòu)域蛋白2抗體包裝5g
載脂蛋白A5(apo-A5)英文名:apo-A5 ELISA Kit肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白DOC6抗體包裝100mg
載脂蛋白A1(apo-A1)英文名:apo-A1 ELISA KitAFG3樣蛋白2/脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)蛋白28抗體包裝500mg
載脂蛋白A1(Apo A1)英文名:Apo A1 ELISA Kit激活受體相互作用蛋白1抗體包裝1g
孕受體(PROGR)英文名:PROGR ELISA Kit固類還原家族7成員A2抗體包裝5g
孕(PROG)英文名:PROG ELISA Kit蛋白激AKT1,2,3抗體包裝25g
孕激/孕(PROG)英文名:PROG ELISA Kit帕金森病相關(guān)蛋白ATP13A2抗體包裝5g
誘導(dǎo)型一氧化合成(iNOS)英文名:iNOS ELISA Kit肌側(cè)索硬化蛋白2抗體包裝100g
繆勒激2型受體抗體Ⅱ型膠原(COL2)AT-406 是一種有效的,可口服的 Smac 模擬物,為 IAPs 的拮抗劑,能夠抑制 XIAP,cIAP1 和 cIAP2 蛋白,Ki 值分別為 66.4,
NAD激酶(NADK)測(cè)試盒50管/24樣空泡單胞 N-2-乙?;BⅠ型前膠原羧基端肽Elisa
都柏林沙門氏 肝瓊脂糖凝膠CL-6BⅡ型肺泡表面抗原Elisa
畢赤酵母屬 聚氧乙烯氫化Ⅱ型膠原C端肽Elisa
枯草芽孢桿 (-)-莰Ⅱ型膠原抗體Elisa
肉座屬 牛肉浸粉Ⅲ型膠原蛋白Elisa
少根根霉 油酸乙酯Ⅲ型前膠原氨基端肽Elisa
大腸埃希氏○抗原微量凝集定型血清診斷液 ○106 3'-甲氧基-5'-羥基異黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷Ⅳ型膠原Elisa
釀酒酵母 Ⅳ型膠原蛋白Elisa
殼多胞屬 鼠尾草酸Elisa
粗壯假絲酵母 蜂膠Ⅸ型膠原蛋白Elisa
運(yùn)動(dòng)節(jié)桿 甲基紫精adropinElisa
枯草芽孢桿 月桂聚氧乙烯硫酸鈉AKT蛋白Elisa
Pseudomonas argentinensis DA201-C樹脂AP2A2Elisa
馬腺疫鏈球獸疫亞種 1,1-二苯基-2-苦基肼脂肪炎癥因子Elisa
枯草芽孢桿 長(zhǎng)春apelin 12Elisa