試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
商品介紹:
測(cè)定意義: CK(EC 2.7.3.2)主要存在于心臟、肌肉以及腦等組織中,能可逆地催化肌酸與ATP之間的轉(zhuǎn)磷?;磻?yīng),在能量運(yùn)轉(zhuǎn)、肌肉收縮和ATP再生中有重要作用,是臨床診斷心腦疾病的一個(gè)重要指標(biāo)。 測(cè)定原理: CK催化磷酸肌酸和ADP生成肌酸和ATP,己糖激酶催化ATP與葡萄糖形成6-磷酸葡萄糖,6-磷酸葡萄糖脫氫酶催化6-磷酸葡萄糖與NADP+生成NADPH,導(dǎo)致340nm光吸收值增加。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器: 天平、低溫離心機(jī)、恒溫水浴鍋、紫外分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板和蒸餾水。 |
商品屬性:
NAD+和NADH的提取:
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白B(SP-B)英文名:SP-B ELISA Kit芳香基硫酯家族蛋白1抗體包裝1g
肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)英文名:SP-A ELISA Kit腫瘤抑制相關(guān)蛋白PHEMX抗體包裝5g
肺表面活性蛋白D(SP-D)英文名:SP-D ELISA Kit精神分裂癥與犰狳重復(fù)基因抗體包裝1g
肥大細(xì)胞類(MCT)英文名:MCT ELISA Kit乙脫氫1型抗體包裝25g
肥大/干細(xì)胞生長(zhǎng)因子受體(Kit/Sl/CD117)英文名:Kit/Sl/CD117 ELISA Kit磷化乙酰羧化抗體包裝5g
芳香(ARO)英文名:ARO ELISA Kit磷化乙酰羧化抗體包裝100g
泛蛋白(Ub)英文名:Ub ELISA Kit磷化腺苷三磷結(jié)合盒轉(zhuǎn)運(yùn)體A1抗體包裝25g
二?;视?/span>(DAG/DG)英文名:DAG/DG ELISA Kit磷化鐵調(diào)節(jié)蛋白1抗體包裝500g
二肽基肽Ⅳ(DPPⅣ)英文名:DPPⅣ ELISA Kit磷化鐵調(diào)節(jié)蛋白1抗體包裝1g
二胺氧化(DAO)英文名:DAO ELISA Kit磷化乙酰羧化抗體包裝5g
兒茶抑(CAT)英文名:CAT ELISA Kit膜粘連蛋白6抗體包裝100mg
兒茶胺(CA)英文名:CA ELISA Kit錨蛋白重復(fù)結(jié)構(gòu)域蛋白42抗體包裝500mg
多萜長(zhǎng)二磷寡糖蛋白環(huán)糊精糖基轉(zhuǎn)移(DDOST/OST-48)英文名:DDOST/OST-48 ELISA Kit胞環(huán)蛋白肌動(dòng)蛋白結(jié)合蛋白抗體包裝25MG
多肽YY(PYY)英文名:PYY ELISA Kit腺病5結(jié)合蛋白BS69抗體(骨形態(tài)發(fā)生蛋白受體相關(guān)分子1)包裝5MG
多巴胺D1受體(D1R)英文名:D1R ELISA Kit載脂蛋白A1抗體包裝1g
銜接蛋白α-Adaptin抗體結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(CTGF)3-Methyladenine (3-MA) is a selective PI3K inhibitor for Vps34 and PI3Kγ with IC
肌酸激酶(CK)測(cè)試盒100管/96樣異常畢赤酵母 2,3,4,5-四氟苯甲環(huán)氧合1Elisa
釀酒酵母 2-氨基-4,6-二苯并噻唑環(huán)氧合2Elisa
尻鏈霉 4-(2-Boc-氨乙基)環(huán)指蛋白180Elisa
大腸埃希氏 全氟辛基季化物環(huán)指蛋白213Elisa
果生鏈核盤 4,7-雙(噻吩-2-基)苯并[C][1,2,5]噻二唑緩激肽Elisa
膨大彎頸霉 3-溴-N,N-二緩激肽受體B2Elisa
中孢短芽孢桿 1,2,3,4-四氫-9H-吡啶并[3,4-b]脫氫Elisa
類志賀鄰單胞 4--2,6-二氟氧化還原Elisa
類干酪乳桿類干酪亞種 3-氨基-4-溴吡唑氧化Elisa
綠色鏈霉 乙二二鄰羥苯基大乙酸鐵鈉活化蛋白CElisa
大豆根瘤 3-甲氧基-4-活化ⅫElisa
羽扇豆根瘤 4-基-2-氟苯酸活化ⅫElisa
黃曲霉 2,2-二甲基-4-戊烯酸活化XElisa
綠色木霉 2-氨基-4,6-甲氧基-1,3,5-三活化XIIIElisa
澳型核果褐腐病 2--4-苯基煙活化XIIIElisa