商品介紹:
測(cè)定意義: α-GAL (EC 3.2.1.22)廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,能專一地催化α半乳糖苷鍵的水解,主要參與棉子糖、水蘇糖、蜜二糖和半乳甘露聚糖等半乳糖苷的降解。α-GAL對(duì)于植物種子的萌發(fā)至關(guān)重要,種子萌發(fā)初期,其催化產(chǎn)生的D-半乳糖通過糖酵解途徑迅速轉(zhuǎn)化和消耗,為種子的萌發(fā)提供最初的能量來(lái)源,后期則主要參與細(xì)胞壁儲(chǔ)藏多糖水解。 測(cè)定原理: α-GAL分解對(duì)-硝基苯-α-D-吡喃半乳糖苷生成對(duì)-硝基苯酚,后者在400nm有最大吸收峰,通過測(cè)定吸光值升高速率來(lái)計(jì)算α-GAL活性。 自備用品: 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
商品屬性:
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提取: NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:先收集細(xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2。△A空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
羚羊角(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: 1,1-Cyclopropanedicarboxylic acid脂肪瘤相關(guān)蛋白抗體包裝5g
硫基葡萄糖(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: TAPS層粘連蛋白β4抗體包裝5MG
硫長(zhǎng)春質(zhì)堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: LY294002黃體激釋放激/促性腺激釋放激抗體包裝1g
硫黃連堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: SHES蛋白賴-6-氧化抗體包裝5g
硫氫小檗堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: PHES白酪激受體抗體包裝25g
硫軟骨(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: AHES同源盒轉(zhuǎn)錄因子LMX1A抗體包裝5g
硫小檗堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: HES轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1結(jié)合蛋白1抗體包裝25g
柳穿魚黃(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: DIPSO Monosodium狂躁基因同源蛋白MFNG抗體包裝5g
龍膽(堅(jiān)龍膽)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: DIPSOE3泛蛋白連接MIB1抗體包裝100g
龍膽(龍膽)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: DMPS主導(dǎo)控制樣蛋白1抗體包裝25g
龍膽花(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: CHPS-Na主導(dǎo)控制樣蛋白2抗體包裝500g
龍膽苦苷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Sodium 2-bromoethanesulphonate絲裂原活化蛋白激6抗體包裝100g
龍膽;2,5-二羥基(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: BICINE磷化絲/蘇蛋白激MST4,MST3,STK25抗體包裝25g
龍脷葉(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: BES Sodium Salt表皮生長(zhǎng)因子樣蛋白Megf10抗體包裝1g
龍腦(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: BES free acidMPP4蛋白抗體包裝5g
結(jié)核分枝桿菌Mycobacterium│tuberculosis 質(zhì)量規(guī)格:99%,santa原裝sc-203765抗磷脂酰甘油抗體試劑盒β,β’-二基烯酰阿寧;β, β-
中國(guó)動(dòng)性微菌Planomicrobium│chinense 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR抗磷脂酰甘油抗體試劑盒3,29-二?;闃侨嗜?3,29
根瘤菌Rhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR培養(yǎng)級(jí)抗磷脂??贵w試劑盒二羥E;Coronarin E
α半乳糖苷酶(αGAL)測(cè)試盒100管/48樣豬丹絲 1,4-二-2,5-二甲α-乳白蛋白Elisa
越南芽孢桿 1-(4-溴苯基)辛烷ACC合成Elisa
紅緣層孔 -甲基-2-苯基烷乙酸氧化Elisa
平田頭菇10-4 2-氨基-6-羥基吡啶麥芽糖Elisa
大腸埃希 1-芐基-5-氧-3-吡咯烷羧酸甲酯糖磷酸異構(gòu)Elisa
嗜酸乳桿 鹽酸氟哌噻噸果糖-1,6-二磷酸縮Elisa
高盧蜜環(huán) 5-氨基-1-(4-)-1H-吡唑-4-甲果糖-6-磷酸-1-磷酸轉(zhuǎn)移Elisa
黑根霉 L-苯甘甲酯鹽酸鹽結(jié)合態(tài)乙酸Elisa
聚生殼 2-溴-3-氟-5-吡啶β甘露聚糖Elisa
枯草芽孢桿枯草亞種 4-甲基芐磺酰β-木糖苷Elisa
沃氏富鹽 BOC-甲基-L-絲二環(huán)己基鹽查爾異構(gòu)Elisa
多主葡萄殼 3-溴吡-2-羧酸甲酯亞硝酸還原Elisa
變異鏈霉 3,4-二甲基異酸苯酯辣椒斑駁病Elisa
明尼蘇達(dá)被毛孢 丁酸異戊酯脫氫奎尼酸合成Elisa
雙孢蘑菇 5-硝基-3,4-二氫萘-1(2H)-酮3-脫氧-阿伯庚酮酸糖-7-磷酸合Elisa
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。