詳細介紹
商品屬性:
產品名稱 | |
檢測方法 | 紫外分光光度法 |
產品規(guī)格 | 50管/48樣 |
產品貨號 | AS632124 |
商品介紹:
測定意義 細胞內脂質的積累是脂質合成與分解失衡的結果。脂肪酸合成增多,而氧化分解降低,會導致細胞內脂質積累。FAS是脂肪酸合成關鍵酶,催化乙酰fu酶A和丙二酰fu酶A而生成長鏈脂肪酸。FAS普遍表達于各種組織細胞中,在哺乳動物肝、腎、腦、肺和乳腺以及脂肪組織中表達豐富。 測定原理 以NADPH為還原力,FAS催化乙酰CoA和丙二酰CoA生成長鏈脂肪酸;通過測定NADPH的減少量,即可推算出FAS活性。 實驗中所需儀器和用品 研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計、1mL石英比色皿、可調式移液槍和雙蒸水。 |
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見分光光度計、臺式離心機、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提取:
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。喊凑战M織質量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。 NADH的提?。喊凑战M織質量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。 | 3、細胞或細菌中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提取:先收集細胞或細菌到離心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104個):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。 NADH的提?。合仁占毎蚣毦诫x心管內,棄上清,按照細菌或細胞數量(104個):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細菌或細胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測。 |
ADH測定操作:
1. 分光光度計預熱30 min,調節(jié)波長到340 nm,蒸餾水調零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,分別記錄15s和75s時吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測定吸光值變化,分別記錄15s和75s時吸光值,分別記為A3和A4。△A測定管=A3-A4。
注意:空白管只需測定一次。
注意事項:
①加入試劑的順序應一致,以保證所有反應板孔溫育的時間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。
④底物A應揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標板時應充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標反應孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實驗中不用的板條應立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質。
⑧試劑應按標簽說明書儲存,使用前恢復到室溫。稀稀過后的標準品應丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。
成纖維細胞生長因子4(FGF4)英文名:FGF4 ELISA Kit艾滋病病制約錨定蛋白抗體包裝5g
成纖維細胞生長因子13(FGF-13)英文名:FGF-13 ELISA Kit腺苷環(huán)化1抗體包裝1g
成纖維細胞生長因子10(FGF10)英文名:FGF10 ELISA Kit核糖核L抑制蛋白抗體包裝5g
超氧化物歧化(SOD)英文名:SOD ELISA KitRho GTP激活蛋白24抗體包裝25g
超敏C反應蛋白(hs-CRP)英文名:hs-CRP ELISA KitGTP激活蛋白ASAP3抗體包裝5g
腸脂肪結合蛋白(iFABP)英文名:iFABP ELISA Kit激活受體1C抗體包裝25g
叉頭框蛋白03(FoxP3)英文名:FoxP3 ELISA Kit整合樣金屬蛋白與凝血13型抗體包裝1g
層連蛋白/板層(LN)英文名:LN ELISA Kit去整合樣金屬蛋白11抗體包裝25g
草胺膦乙酰轉移(PAT)英文名:PAT ELISA Kit去整合樣金屬蛋白12抗體包裝5g
不對稱二基精(ADMA)英文名:ADMA ELISA Kit去整合樣金屬蛋白15抗體包裝1g
補體因子H(CFH)英文名:CFH ELISA Kit去整合樣金屬蛋白2抗體包裝25g
補體片斷5a(C5a)英文名:C5a ELISA Kit載脂蛋白E2受體抗體包裝5g
補體片斷3a(C3a)英文名:C3a ELISA Kit腺苷A1受體抗體包裝100g
補體蛋白5(C5)英文名:C5 ELISA Kit通道蛋白0抗體包裝1g
補體蛋白4(C4)英文名:C4 ELISA Kit轉錄因子AP-2γ抗體包裝25g
淀粉樣肽前體蛋白抗體結締組織生長因子(CTGF)Isoindigotin is used in the therapy of Y.
脂肪酸合成酶(FAS)測試盒50管/48樣谷棒桿 5-溴-3-氟-2(1H)-吡啶酮甲胎蛋白異質體3Elisa
紅緣層孔 2,5-二溴-3-氟吡啶甲肟前列腺D2Elisa
異配囊接霉 3-溴-2-氟甲狀旁腺Elisa
達里湖芽孢桿 4-芐氧基-3,5-二氟苯酸甲狀腺抗體;甲狀腺激球蛋白Elisa
蒂蓋姆頭珠霉 乙酰酮鈰水合物甲狀腺激阻斷抗體Elisa
相思根瘤 2,3-二氟-4-丁氧基苯酸甲狀腺過氧化物Elisa
那波鏈霉 5-溴-7-甲基-1H-吲唑甲狀腺結合球蛋白Elisa
谷棒桿 甲狀腺鈉轉運體Elisa
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羅爾細薄 6-羧基四熒光甲狀腺受體相互作用蛋白6Elisa
根腐平臍蠕孢 4-(三氟甲基)鹽酸鹽甲狀腺Elisa
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psilent-dual1(pSD1) 5,10-二氫-5,10-二甲基吩間皮Elisa
哈氏弧 三聚聚磷酸鹽堿性成纖維生長因子Elisa
銅綠假單胞(綠膿桿)* 對異丁堿性成纖維生長因子9Elisa