即用型細(xì)菌凍存液

即用型細(xì)菌凍存液公司正在銷(xiāo)售的產(chǎn)品：Anti-SLC26A3 Antibody人低密度脂蛋白復(fù)合物
Anti-SLC27A5 Antibody小鼠膽囊收縮素/腸促肽
Anti-SLC28A2 Antibody大鼠17羥皮質(zhì)類(lèi)固
Anti-SLC28A2 Antibody小鼠腦腸肽
Anti-SLC30A9 Antibody人抗增殖核抗原抗體
Anti-SLC34A2 Antibody大鼠N-乙

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購(gòu)！

儲(chǔ)存條件：室溫,12個(gè)月

用途：各種常見(jiàn)細(xì)菌的冷凍保存

注意事項(xiàng)：主要由無(wú)菌甘油、防腐劑等組成。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱(chēng)量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱(chēng)量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱(chēng)取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

魯氏接合酵母NADH氧化還原輔10抗體Human ADAM12(Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 12) ELISA Kit鈣調(diào)磷(CaN)

乳乳球菌膜相關(guān)的蛋白質(zhì)HEM2抗體Human CD200(OX-2 membrane glycoprotein) ELISA Kit鈣調(diào)結(jié)合蛋白(CALD)

木伏革菌=佐佐木薄膜革菌跨膜受體蛋白Notch-2抗體Human CCL8(C-C motif chemokine 8) ELISA Kit鈣腔蛋白(CALU)

黃桿菌磷化KB抑制蛋白β抗體Human MME(Neprilysin) ELISA Kit鈣聯(lián)蛋白(CNX)

變黑梨花歐文氏菌磷化核因子p50/k基因結(jié)合核因子抗體Human ENG(Endoglin) ELISA Kit鈣聯(lián)蛋白(calnexin)

球形節(jié)桿菌泛樣蛋白NEDD8抗體Human CD147(Extracellular Matrix Metalloproteinase Inducer) ELISA Kit鈣離子通道抗體(VGCC)

擬莖點(diǎn)霉核因子1C型抗體Human CD13(Aminopeptidase N) ELISA Kit鈣結(jié)合蛋白(CR)

釀酒酵母磷化神經(jīng)正五聚體1抗體Human sCD163(Soluble Cluster of Differentiation 163) ELISA Kit鈣激活中性蛋白6(CAPN6)

黑曲霉RNA結(jié)合蛋白NOB1抗體Human ApoB100(Apolipoprotein B100) ELISA Kit鈣激活中性蛋白1(CAPN1)

簡(jiǎn)青霉磷化T激活核轉(zhuǎn)錄因子4抗體Human CCL17(C-C motif chemokine 17) ELISA Kit鈣蛋白抑制蛋白(CAST)

釀酒酵母膽汁受體抗體Human ADAM9(Disintegrin and metalloproteinase domain-containing protein 9) ELISA Kit鈣蛋白抑抗體(ACAST-DⅣ)

 (蠟狀芽胞桿菌)NFKB激活蛋白抗體Human CCL18(C-C motif chemokine 18) ELISA Kit鈣蛋白2(M/II)大亞基(CAPN2)(CAPN2)

根瘤菌NLE1蛋白抗體Human ADAMTS1(A disintegrin and metalloproteinase with thrombospondin motifs 1) ELISA Kit鈣/鈣調(diào)依賴性蛋白激2(CAMK 2)

季也蒙假絲酵母磷化一氧化氮合成3（內(nèi)皮型）抗體Human MIF(Macrophage migRation inhibitory factor) ELISA Kit富組蛋白(HTN5)

傳染性法氏囊病病磷化一氧化氮合成3（內(nèi)皮型）抗體Human MICA(MHC class I polypeptide-related sequence A) ELISA Kit富組蛋白(histatin-5)

芽孢桿菌屬磷化一氧化氮合成3（內(nèi)皮型）抗體Human MIP-3β(Macrophage Inflammatory Protein 3β) ELISA Kit富組糖蛋白(HRG)

凝結(jié)芽孢桿菌Bacillus│coagulans 質(zhì)量規(guī)格：>98%,VEGFR2選擇性抑制劑

大腸埃希菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR

變異鏈霉菌Streptomyces│variabilis 質(zhì)量規(guī)格：>98%,標(biāo)準(zhǔn)品
即用型細(xì)菌凍存液sPECAM-1/sCD31(Mouse soluble platelet endothelial cell adhesion molecule 1) ELISA Kit  小鼠可溶性血小板內(nèi)皮細(xì)胞粘附分子1規(guī)格： 48T

BMP-7(Mouse Bone morphogenetic protein 7) ELISA Kit  小鼠骨成型蛋白7規(guī)格： 48T

HA(Mouse Hyaluronic acid) ELISA Kit  小鼠透明質(zhì)suan規(guī)格： 96T

GLP-1HA(Mouse ghcagons-like pepfide 1) ELISA Kit  小鼠胰高血糖su樣肽1規(guī)格： 48T

CCK(Mouse Cholecystokinin) ELISA Kit  小鼠膽囊收縮su/腸促胰mei肽規(guī)格： 48T

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類(lèi)型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。