公司產(chǎn)品僅供科研使用:
商品介紹:
商品介紹 測(cè)定意義: CA是線粒體三羧酸循環(huán)的第一個(gè)中間產(chǎn)物,由檸檬酸合酶催化乙酰CoA與草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循環(huán)強(qiáng)度的主要指標(biāo)之一。 配合測(cè)定丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性、乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量,其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脫氫酶活性變化可以反映糖酵解進(jìn)行程度,(2)綜合分析丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性和乙酰CoA含量變化可以反映脂肪酸β-氧化途徑提供的乙酰CoA情況,(3)乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量變化可以反映三羧酸循環(huán)進(jìn)行狀況。 測(cè)定原理: CA在檸檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性條件下,α-酮酸進(jìn)一步與苯肼反應(yīng),生成相應(yīng)的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在330nm處有吸收峰,該波長(zhǎng)下吸光度的變化程度可反映出CA的含量。 自備儀器和用品: 可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、研缽、蒸餾水。 |
常見樣本處理方法:
1、血清(漿)樣品:直接檢測(cè)。
2、細(xì)菌、細(xì)胞或組織樣品的制備: 細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):提取液體積(mL)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL提取液) ,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次)8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。組織:按照組織質(zhì)量(g) :提取液體積(mL)為1:5~10的比例(建議稱取約0.1g組織,加入1mL提取液),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。
產(chǎn)品優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡(jiǎn)便:雙試劑,直接操作,快速、簡(jiǎn)便。
2、取樣量微:需要的樣本量是羥胺法的1/10。
3、靈敏度高:檢測(cè)線0.5U/ml,是羥胺法5倍,鄰苯三酚法的200倍
4、穩(wěn)定性好:批內(nèi)CV=5.50%,批間CV=3.32%,試劑盒2~8℃存放3個(gè)月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.2%。6、回收試驗(yàn): X =102.3%。7、受外界影響因素小:干擾因素少,重復(fù)性強(qiáng)。且特異性強(qiáng),不受類SOD物質(zhì)的干擾8、測(cè)試面廣:可測(cè)動(dòng)物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
測(cè)定步驟:
1.加樣
1. 除包被外都需45度加樣
2.加樣體積要準(zhǔn)確
3.管底加樣,不能加在管壁上
4.加樣時(shí)不能產(chǎn)生氣泡
2.溫浴
1.加標(biāo)本后和加結(jié)合物后,應(yīng)立即放入按規(guī)定的反應(yīng)溫 度的水浴箱。
2.各ELISA板不應(yīng)疊在一起。
3.為避免蒸發(fā),板上應(yīng)加蓋,或?qū)迤椒旁诘撞繅|有濕 紗布的金屬濕盒中。
4.加入底物后,反應(yīng)的時(shí)間和溫度通常不做嚴(yán)格要求。 如室溫高于20℃,ELISA板可避光放在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上,以便 不時(shí)觀察,待對(duì)照管顯色適當(dāng)時(shí),即可終止酶反應(yīng)。
3.洗滌
1.洗滌在ELISA過(guò)程中不是反應(yīng)步驟,但卻 是決定實(shí)驗(yàn)成敗的關(guān)鍵。
2.目的是洗去反應(yīng)液中沒有與固相抗原或 抗體結(jié)合的物質(zhì)以及在反應(yīng)過(guò)程中非特 異性吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。
4.讀板
1.陰性對(duì)照顏色極淺,在定性測(cè)定中一般 可采用目視比色。
2.如用酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果,準(zhǔn)確性決定于 ELISA板底的平整與透明度、酶標(biāo)儀的質(zhì) 量和軟件的算法。
白頭翁皂苷E英文名: Nickel (II) fluoride tetrahydrate上皮膜蛋白3抗體包裝5g
白頭翁皂苷E-1英文名: Silicon (IV) oxide膜蛋白EVC2抗體包裝1g
白頭翁皂苷E-2英文名: Strontium fluoride哺乳動(dòng)物室管膜相關(guān)蛋白1抗體包裝5g
白頭翁皂苷E-3英文名: Syringaldehyde內(nèi)皮粘附分子抗體包裝10g
白土苓(短柱肖菝契)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Tetrazolium violet上皮有絲分裂蛋白抗體包裝50g
白土苓(華南肖菝葜)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: 2-MethylindoleEmerin蛋白抗體包裝25g
白薇(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Aluminum ammonium sulfate, dodecahydrate外信號(hào)調(diào)節(jié)激5抗體包裝5g
白鮮堿(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: AMP buffer concentrate磷/磷二酯家族成員5抗體包裝1g
白鮮皮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Benzimidazole早期生長(zhǎng)反應(yīng)蛋白2抗體包裝25g
白楊(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Carboxypeptidase B磷化雌激受體β抗體包裝5g
白楊-7-O-龍膽二糖苷英文名: Cobalt (II) carbonate, hydrate乙激β抗體包裝1g
白英(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: dTDP微管相關(guān)末端結(jié)合蛋白2抗體包裝5g
白芷(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Galactose oxidase減數(shù)分裂內(nèi)切EME1抗體包裝1g
百部(對(duì)葉百部)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Iron (II) oxalate, dihydrate延伸突觸蛋白2抗體包裝25g
百部(直立百部)(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Lead (II) chloride延伸突觸蛋白1抗體包裝5g
40044=ATCC23908=CBS804.68=IFO12862=ISP資源名稱: 脆弱鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR通道蛋白4抗體試劑盒;Ginsenoside
出芽短梗霉Aureobasidium│pullulans 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品通道蛋白3試劑盒人參皂苷RD;Ginsenoside R
大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR痘帶狀皰疹病IgM試劑盒人參皂苷RC;Ginsenoside R
線粒體檸檬酸(MCA)含量測(cè)試盒100管/96樣弗雷德里克斯堡假單胞 3--2-吡甲酸甲酯蛋白聚糖Elisa
小奧德蘑 1,3-雙(2-異基-2-基)苯堿性成纖維生長(zhǎng)因子抗體Elisa
三骨菇 反式-4-(叔丁氧羰基氨基)環(huán)己基羧酸甘油二酯Elisa
桔青霉 4-氮雜-3-甲過(guò)氧化物體Elisa
喜寒犁頭霉 2-甲基丁酸-3-甲基丁酯核內(nèi)蛋白Elisa
胡椒枯萎病 富馬酸單甲酯結(jié)核桿抗原Elisa
短小芽孢桿 DL-二硫蘇糖銅鋅過(guò)氧化物岐化Elisa
筆狀地霉 2-甲基嗎啉趨化因子C-C-基元受體6Elisa
大腸埃希 亮叔丁酯鹽酸鹽磷酸化肝生長(zhǎng)因子受體Elisa
鏈霉 咪唑并[1,2-a]吡啶分泌型堿性磷酸Elisa
大腸埃希氏 N-甲基-4-溴苯甲酰Smads2Elisa
黃芪葉桿 3-溴-4-氟Smads7Elisa
紅緣擬層孔 苯并惡唑糖蛋白AElisa
運(yùn)動(dòng)張樹政氏 乳糖酸鈉白蛋白抗體Elisa
奇異變形桿49005 鹽酸左電壓依賴性陰離子通道蛋白1Elisa
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽、EDTA
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
用于測(cè)定。