商品屬性:
商品介紹:
測(cè)定意義: CA是線粒體三羧酸循環(huán)的第一個(gè)中間產(chǎn)物,由檸檬酸合酶催化乙酰CoA與草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循環(huán)強(qiáng)度的主要指標(biāo)之一。 配合測(cè)定丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性、乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量,其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脫氫酶活性變化可以反映糖酵解進(jìn)行程度,(2)綜合分析丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性和乙酰CoA含量變化可以反映脂肪酸β-氧化途徑提供的乙酰CoA情況,(3)乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量變化可以反映三羧酸循環(huán)進(jìn)行狀況。 測(cè)定原理: CA在檸檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性條件下,α-酮酸進(jìn)一步與苯肼反應(yīng),生成相應(yīng)的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在330nm處有吸收峰,該波長下吸光度的變化程度可反映出CA的含量。 自備儀器和用品: 可見分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL石英比色皿、研缽和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提?。?/span>
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:按照組織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4。△A測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說明書中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時(shí)間打開蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說明書儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
百合(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Lithium citrate, tetrahydrate紅膜蛋白4.2抗體包裝100g
百兩金A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: MU-Gal轉(zhuǎn)錄因子ELYS蛋白抗體包裝25g
百秋李(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: MU-GLU內(nèi)皮粘蛋白EMCN抗體包裝500g
百蕊草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: MUP, disodium salt, trihydrate調(diào)節(jié)鳥核苷交換因子1抗體包裝25g
百蕊草I/山柰-3-葡萄糖鼠李糖苷/阿福豆苷(標(biāo)準(zhǔn)...英文名: POPOP磷化轉(zhuǎn)錄因子E2F1抗體包裝5g
柏子仁(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: PPO上皮特異性轉(zhuǎn)錄因子1抗體包裝100g
敗醬草(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Sodium glycolate內(nèi)皮2抗體包裝25g
斑蝥(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Span* 60內(nèi)皮受體蛋白酪激B3抗體包裝1g
板藍(lán)根(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Titanium (IV) oxide軟骨外胚層發(fā)育不良相關(guān)蛋白抗體包裝250mg
半邊蓮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Triton X-405髓鞘蛋白P0樣蛋白2抗體包裝5g
半甘草異黃B英文名: Urinary trypsin inhibitor fragment雌激受體α抗體包裝25MG
半夏(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Zinc oxide內(nèi)質(zhì)網(wǎng)核信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)蛋白2抗體包裝1g
半枝蓮(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: 4(5)-Methylimidazole鋅指蛋白521抗體包裝250mg
寶藿苷I,羊藿次苷II(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Aluminum hydroxide大腸桿菌埃希桿菌O6抗體(腸致病性大腸桿菌O6)包裝5g
寶藿苷II;大花羊藿苷A;意瑞苷A(標(biāo)準(zhǔn)品)英文名: Ammonium phosphate, tribasic , trihydrate植物延展-β包裝100mg
釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格:總含量>95% ,進(jìn)分痘帶狀皰疹病IgG試劑盒瑞香;7,8-Dihydroxycou
熒光假單胞菌Pseudomonas│fluorescens 質(zhì)量規(guī)格:>98%;NK1受體拮抗劑雙氫睪試劑盒肉桂;Cinnamyl alcohol
圍小從殼Glomerella│cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR衰變加速因子試劑盒肉桂;Cinnamaldehyde
線粒體檸檬酸(MCA)含量測(cè)試盒50管/48樣麥芽糖假絲酵母 4-氮雜可溶性CD40分子Elisa
新月彎孢 Boc-5-氨基戊酸γ氨基丁酸受體Elisa
黃孢平革 2-乙酰基噻唑粘蛋白5B抗體Elisa
腐皮殼 磷酸一水合物磷酸二酯3AElisa
弗雷德里克斯堡假單胞 耐曬猩紅RC鉤端螺旋體Elisa
不吸水鏈霉 九氟戊酸蘭尼堿受體3Elisa
寄生孢 D-谷二甲酯鹽酸鹽6磷酸葡萄糖Elisa
巨大曲霉 2-溴-5-甲酯5磷酸核酮糖Elisa
禾粘座孢霉(或禾漆斑) N,N-二異酰甲殼質(zhì)蛋白40Elisa
鹽水鹽土生古 (R)-2-羥基-3-苯基酸甲酯氨基酸Elisa
豬丹絲 8-溴-1-辛烯嗜TI型病Elisa
栗疫 4-羥基苯酸頻哪酯阿伯糖苷Elisa
波恩佩島蒼黃色桿 D-2,4-二氨基丁酸ZDNA結(jié)合蛋白1Elisa
木霉 5--2-甲R(shí)AS癌基因家族Elisa
膠孢 異壬酸天門冬氨基轉(zhuǎn)移Elisa