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產(chǎn)品名稱(chēng) | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
脯氨酸提取試劑 | 500ml | FS-R6567 |
產(chǎn)品分類(lèi):細(xì)胞組分分離
儲(chǔ)存條件:室溫,12個(gè)月
用途:用于脯氨酸的提取。
配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理:
1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因;
EDTA是四元酸,是一種白色晶體粉末,常用H4Y表示,溶解度很小,室溫溶解度為0.02g/100g H2O。
2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑,基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理:稱(chēng)量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層,然后用水洗凈,烘干。
配制步驟:
1、取適量鋅片放在100mL燒杯中,用0.1mol·L-1 HCl溶液(自配)清洗1min,再用自來(lái)水、純水洗凈,烘干、冷卻。
2、用直接稱(chēng)量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱(chēng)取0.15~0.2g Zn,蓋好小表面皿。
3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸,待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁,小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中,用純水稀釋至標(biāo)線,搖勻。
實(shí)驗(yàn)方法與判定:
1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性
2.對(duì)照品溶液的配制:精密量取腦對(duì)照品適量,加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液,作為對(duì)照品溶液。
3.色譜條件:以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱;柱溫120℃;進(jìn)樣口溫度250℃;檢測(cè)器溫度250℃;分流進(jìn)樣,分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。
4.實(shí)驗(yàn)方法:配制的對(duì)照品溶液,一份置冷處保存,一份置室溫中保存,在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液,三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法,并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái),保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%,驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。
石膽(標(biāo)準(zhǔn)品) RivaroxabanDEK癌基因結(jié)合蛋白包裝100g
(標(biāo)準(zhǔn)品) ApixabanPSD95結(jié)合蛋白1抗體包裝25g
舒巴坦(標(biāo)準(zhǔn)品) PerifosinePSD95結(jié)合蛋白2抗體包裝5g
(標(biāo)準(zhǔn)品) Anagrelide hydrochloride PSD95結(jié)合蛋白4抗體包裝25g
舒林(標(biāo)準(zhǔn)品) Saquinavir mesylate雙PHD-D4鋅指蛋白2抗體包裝5g
舒林(標(biāo)準(zhǔn)品) Vardenafil hydrochloride trihydrate雙特異性磷22抗體包裝100g
舒替堿(標(biāo)準(zhǔn)品) Vardenafil hydrochloride trihydrateErdj5/DNAJC10蛋白抗體包裝25g
雙環(huán)(標(biāo)準(zhǔn)品) Bestatin,Ubenimex腫瘤調(diào)亡/腫瘤壞死因子受體死亡受體6抗體包裝25ml
雙磺 (聚磺雜質(zhì))(標(biāo)準(zhǔn)品) Bestatin,Ubenimex跨膜TMIGD1蛋白抗體包裝5ml
雙脒(標(biāo)準(zhǔn)品) (3,4-Dimethoxyphenyl)acetic acid軸絲中鏈動(dòng)力蛋白抗體包裝100ml
雙硫化合物(標(biāo)準(zhǔn)品) PD-0325901軸絲動(dòng)力蛋白7抗體包裝25ml
雙硫侖(標(biāo)準(zhǔn)品) Sitaxsentan sodium; TBC-11249; Thelin環(huán)指蛋白19抗體包裝500ml
雙芬(標(biāo)準(zhǔn)品) Sitaxsentan sodium; TBC-11250; Thelinδ-連環(huán)蛋白抗體包裝25g
雙芬(標(biāo)準(zhǔn)品) Sitaxsentan sodium; TBC-11251; Thelin防御β2抗體包裝1g
雙芬鈉(標(biāo)準(zhǔn)品) Tetraxetan/DOTA/1,4,7,10-Tetraazacyclododecane-1,4,7,10-tetraacetic acid磷化信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)功能磷蛋白DAB2抗體包裝1g
CGMCC1.6765=JCM1233=ATCC29544=BCRC13988=CCUG14558=CDC4562-70資源名稱(chēng): 阪崎腸桿菌 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品胃蛋白原I 楊;Salicylic acid
: HBUM80208資源名稱(chēng): 絳紅產(chǎn)色小單胞菌 質(zhì)量規(guī)格:>99,BR胃蛋白原C試劑盒石蒜堿;Lycorine
ATCCBAA-531=DSM16702=IFO16725=JCM11434=NBRC16725資源名稱(chēng): 緩生新鞘菌 質(zhì)量規(guī)格:HPLC>98%,標(biāo)準(zhǔn)品胃蛋白原A試劑盒山豆根色滿二氫黃Ⅰ;
脯氨酸提取試劑P-HP1/FITC 熒光標(biāo)記抗異染色質(zhì)蛋白1化(果蠅)IgG
P-HP1/FITC 熒光標(biāo)記抗異染色質(zhì)蛋白1化(果蠅)IgG
Phospho-HP1 gamma (Ser83) /FITC 熒光標(biāo)記化染色質(zhì)相關(guān)蛋白1-γIgG
PI3K/P85 alpha/FITC 熒光標(biāo)記脂酰肌激IgG
PI3K p85 (Tyr458)/p55 (Tyr199) /FITC 熒光標(biāo)記化脂酰肌激IgG
PI3 Kinase p1 delta/FITC 熒光標(biāo)記脂酰肌激催化亞單位DIgG
PIBF/FITC 熒光標(biāo)記孕激誘導(dǎo)阻斷因子IgG
PIM1/FITC 熒光標(biāo)記前病整合位點(diǎn)蛋白1IgG
使用方法:
1. 常用篩選濃度
注意:用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型,培養(yǎng)基,生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化,推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線(kill curve),即劑量反應(yīng)性曲線,來(lái)確定最佳篩選濃度。
一般而言,哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL;細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL;真菌300-1000μg/mL。
2. 殺滅曲線的建立
注意:為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株,需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度,可通過(guò)建立殺滅曲線(劑量反應(yīng)曲線)來(lái)實(shí)現(xiàn),至少選擇5個(gè)濃度。
1) 第一天:未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上,37℃,CO2培養(yǎng)過(guò)夜;注:對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞,可增加接種量。
2) 根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型,設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例,可設(shè)定50,100,250,500,750,1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml,然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。
3) 第二天:替換舊的培養(yǎng)基,換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。
4) 接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。
5) 按照固定的周期(如每2天)進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)(通常是7-10天)內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。
3. 穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選
1) 轉(zhuǎn)染48h后,用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意:細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密,其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果,最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。
3) 篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克?。洌┑男纬汕闆r。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間,這取決于宿主細(xì)胞類(lèi)型,轉(zhuǎn)染,以及篩選效果。
4) 挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板,繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。
5) 之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。