商品屬性:
商品介紹:
測(cè)定意義: S-PPO主要來(lái)源于土壤微生物、植物根系分泌物及動(dòng)植物殘?bào)w分解釋放,催化土壤中芳香族化合物氧化成醌,醌與土壤中蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、礦物等物質(zhì)反應(yīng)生成有機(jī)質(zhì)和色素,完成土壤芳香族化合物循環(huán),用于土壤環(huán)境修復(fù)。測(cè)定原理:S-PPO能夠催化鄰苯三酚產(chǎn)生紫色物質(zhì),后者在430nm有特征光吸收。自備用品:可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL玻璃比色皿100mL(不允許快遞)、研缽、冰和蒸餾水。 |
試劑的組成和配制:
酸性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;堿性提取液:液體50mL×1瓶,4℃保存;試劑一:液體10 mL×1瓶,4℃保存;試劑二:液體3 mL×1瓶,4℃保存;試劑三:粉劑×1瓶,-20 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑四:粉劑×1瓶,4 ℃保存,用時(shí)加入3mL蒸餾水,混勻,用不完的試劑4℃保存一周;試劑五:液體3.6mL×1瓶,4 ℃保存;試劑六:液體30mL×1瓶,4 ℃保存;試劑七:液體50mL×1瓶,4 ℃保存。
自備儀器和用品:
可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、移液器、1 ml玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
NAD+和NADH的提取:
1、血清(漿)中NAD+和NADH的提取 NAD+的提?。喊凑昭澹{)體積(ml):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml酸性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提取:按照血清(漿)體積(ml):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建 議取約0.1ml血清(漿),加入1ml堿性提取液),95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失); 冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中 和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 2、組織中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):酸性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml酸性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。喊凑战M織質(zhì)量(g):堿性提取液體積(ml)為1:5~10的比例(建議取約0.1g 組織,加入1ml堿性提取液),冰浴研磨,95℃水浴5min(蓋緊,以防止水分散失);冰浴 中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加入500μl酸性提取液使之中和, 混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 | 3、細(xì)胞或細(xì)菌中NAD+和NADH的提?。?/span> NAD+的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):酸性 提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml酸性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 NADH的提?。合仁占?xì)胞或細(xì)菌到離心管內(nèi),棄上清,按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104個(gè)):堿 性提取液體積(ml)為500~1000:1的比例(建議500萬(wàn)細(xì)菌或細(xì)胞加入1ml堿性提取液), 超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔10s,重復(fù)30次),95℃水浴5min (蓋緊,以防止水分散失);冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心10min;取500μl上清液,加 入500μl酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4 ℃離心10min,取上清,置冰上待測(cè)。 |
ADH測(cè)定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到340 nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 試劑二在25℃水浴中保溫30 min。
3. 空白管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL蒸餾水、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A1和A2?!鰽空白管=A1-A2。。
4. 測(cè)定管:在1mL石英比色皿中依次加入100μL上清液、800μL試劑二和100μL試劑四,迅速混勻后于340nm測(cè)定吸光值變化,分別記錄15s和75s時(shí)吸光值,分別記為A3和A4?!鰽測(cè)定管=A3-A4。
注意:空白管只需測(cè)定一次。
注意事項(xiàng):
①加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時(shí)間一樣。
②使用干凈的塑料容器配置洗滌液。
③按照說(shuō)明書(shū)中標(biāo)明的時(shí)間、加液的量及順序進(jìn)行溫育操作。
④底物A應(yīng)揮發(fā),避免長(zhǎng)時(shí)間打開(kāi)蓋子。底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實(shí)驗(yàn)完成后應(yīng)立即讀取OD值。
⑤洗滌酶標(biāo)板時(shí)應(yīng)充分拍干,不要將吸水紙直接放入酶標(biāo)反應(yīng)孔中吸水。
⑥使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時(shí),避免使用帶金屬部分的加樣器 。
⑦實(shí)驗(yàn)中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。
⑧試劑應(yīng)按標(biāo)簽說(shuō)明書(shū)儲(chǔ)存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過(guò)后的標(biāo)準(zhǔn)品應(yīng)丟棄,不可保存。
⑨不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。
葡聚糖D20/右旋糖苷英文名: Phospholipase A2 ActivatingPeptide蛋白酪磷-1B抗體包裝1g
普克索堿英文名: PhysalaeminCyclin A1相互作用蛋白抗體包裝5g
普洛芬英文名: PKI-tide野生型P53誘導(dǎo)基因1單克抗體包裝1g
普侖司特英文名: Plaet Factor 4 (58-70)(human)多囊腎蛋白1抗體包裝1g
普瑞巴林英文名: Pneumadin (human)多囊腎蛋白2抗體包裝250mg
齊多夫定英文名: Pneumadin (rat)凋亡相關(guān)蛋白4抗體包裝2ml
齊留通英文名: Prion Peptide (106-126),Human磷脂酰肌激催化亞單位D抗體包裝25g
羥磺鈣英文名: Proadrenomedullin (1-20)(human)血小板源性生長(zhǎng)因子受體β樣蛋白抗體包裝5g
氫化奎寧定;雙氫奎尼丁英文名: Proadrenomedullin (45-92)(human)磷化磷酯Cβ3抗體包裝25ml
氫檳榔堿()英文名: Protein Kinase C (19-31)磷化蛋白激樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激抗體包裝5ml
氫檳榔堿; 檳榔堿氫鹽(國(guó)產(chǎn))英文名: Protein Kinase C (19-36);Protein Kinase C Selective Inhibitor Protein6磷果糖激2抗體包裝100g
氫達(dá)那新英文名: Protein Kinase C (530-558)磷化6磷果糖激2抗體包裝1g
氫后馬托品英文名: pTH-Related Protein Splice Isoform 3 (140-173) (human)磷化磷脂酰肌激抗體包裝25g
氫加蘭他敏英文名: pTH (13-34) (human)磷化蛋白激C α/β2抗體包裝5g
氫右沙芬英文名: pTH (3-34) (bovine)蛋白激C α抗體包裝100g
雜色曲霉原變種Aspergillus│versicolor var. versicolor 質(zhì)量規(guī)格:>98%標(biāo)準(zhǔn)品核心蛋白聚糖試劑盒阿馬堿;Raubasine
致病疫霉Phytophthora│infestans (Mont.) de Bary 質(zhì)量規(guī)格:>98%核糖體合成蛋白NSA2同源物試劑盒阿奇霉;Azithromycin
粉紅單端孢Trichothecium│roseum 質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR核糖體蛋白S9試劑盒安格洛苷C;Angoroside C
土壤多酚氧化酶(SPPO)測(cè)試盒50管/48樣黑根霉 D-蘇式-Beta-對(duì)甲砜基苯基絲乙酯血小板膜糖蛋白Ⅱb;ⅢaElisa
解糖假蒼白桿 雙硫氧吡啶糖蛋白ⅤElisa
許旺酵母 4-硫脲補(bǔ)體片段2aElisa
白僵 2-(2-乙氧基)乙酰補(bǔ)體片段2bElisa
西蕃蓮莖基腐病 2-異基咪唑補(bǔ)體片段3bElisa
赭曲霉 3-溴-4-甲補(bǔ)體片段4aElisa
金黃色葡萄球 3',4'-二氟苯乙酮補(bǔ)體片段4bElisa
枯草芽孢桿 3-氟-4-甲氧基甲酯Elisa
枯草芽胞桿 3,4-二氟甲酯3β羥基類固脫氫Elisa
瓜果腐霉 反式-4-氨基環(huán)己羧酸17β羥基類固脫氫Elisa
香菇 2-三氟生長(zhǎng)因子Elisa
水發(fā)光桿 乙酸葉酯半胱Elisa
蘇云金芽胞桿印第安那亞種 4--2-去泛化Elisa
解脂亞羅酵母 2,2,6,6-四甲基血管生長(zhǎng)Elisa
脆泊氏孔 羅西酮鹽酸鹽球蛋白Elisa