Tris凝膠緩沖液

Tris凝膠緩沖液公司正在銷(xiāo)售的產(chǎn)品：Anti-TP53 Antibody人食欲素受體
Anti-TP53I11 Antibody人生長(zhǎng)釋放肽ghrelin
Anti-TOX Antibody大鼠β干擾素
Anti-TP53BP2 Antibody大鼠血小板因子3
Anti-TP53AIP1 Antibody人鈣調(diào)素
Anti-TP53I3 Antibody大鼠可溶性瘦素受體
Anti-TP53I

公司產(chǎn)品僅用于科研具有質(zhì)量可靠、效果穩(wěn)定、靈敏度高、操作簡(jiǎn)單、易保存等特點(diǎn)，咨詢并訂購(gòu)！

產(chǎn)品分類(lèi)：蛋白電泳

儲(chǔ)存條件：4℃,12個(gè)月

用途：配制Tris非變性連續(xù)PAGE凝膠

注意事項(xiàng)：由Tris-hcl等組成。

 

 

配制與標(biāo)定的實(shí)驗(yàn)原理：

1、用EDTA二鈉鹽配制EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的原因；

EDTA是四元酸，是一種白色晶體粉末，常用H4Y表示，溶解度很小，室溫溶解度為0.02g/100g H2O。

2、標(biāo)定EDTA標(biāo)準(zhǔn)溶液的工作基準(zhǔn)試劑，基準(zhǔn)試劑的預(yù)處理：稱量前一般應(yīng)先用稀鹽酸洗去氧化層，然后用水洗凈，烘干。

配制步驟：

1、取適量鋅片放在100mL燒杯中，用0.1mol·L-1 HCl溶液（自配）清洗1min，再用自來(lái)水、純水洗凈，烘干、冷卻。

2、用直接稱量法在干燥小燒杯中準(zhǔn)確稱取0.15～0.2g Zn，蓋好小表面皿。

3、用滴管從燒杯口加入5mL 1:1 鹽酸，待Zn溶解后吹洗表面皿、杯壁，小心地將溶液轉(zhuǎn)移至250mL容量瓶中，用純水稀釋至標(biāo)線，搖勻。

 

 

實(shí)驗(yàn)方法與判定：

1.對(duì)照品溶液的穩(wěn)定性

2.對(duì)照品溶液的配制：精密量取腦對(duì)照品適量，加無(wú)水乙醇制成每1ml含腦1mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。

3.色譜條件：以交聯(lián)鍵合聚乙二醇為固定相的毛細(xì)管柱；柱溫120℃；進(jìn)樣口溫度250℃；檢測(cè)器溫度250℃；分流進(jìn)樣，分流比10:1。理論塔板數(shù)按腦計(jì)算應(yīng)不低于10000。

4.實(shí)驗(yàn)方法：配制的對(duì)照品溶液，一份置冷處保存，一份置室溫中保存，在第1、3、7、10、15天重新配制一份對(duì)照品溶液，三種儲(chǔ)備液同時(shí)稀釋制成每1ml中約含50ug的溶液。照氣相色譜法，并依據(jù)新對(duì)照品的峰面積計(jì)算原對(duì)照品溶液的含量。記錄下來(lái)，保證原對(duì)照品溶液含量在考察期相對(duì)平均偏差不超過(guò)2.0%，驗(yàn)證對(duì)照品溶液在使用期內(nèi)穩(wěn)定可靠。

 MG1655 ΔendA ΔrecA (DE3) 纖溶相關(guān)蛋白B2抗體Anti-CCL2 AntibodyEJ抗體/抗甘酰tRNA合成抗體(EJ/GlyRS)

茯苓多聚合α/β/γ抗體Anti-CCL3 AntibodyEgl九同源物1(EGLN1/C1orf12/PNAS-118/PNAS-137)

耐熱裸囊菌含脯突觸相關(guān)蛋白相互作用蛋白1抗體Anti-CCL4 AntibodyE3泛蛋白連接TRIM68(TRIM68)

釀酒酵母外周蛋白2抗體Anti-CCL26 AntibodyD-乳脫氫(D-LDH)

乳菌計(jì)數(shù)模擬乳粉質(zhì)控樣品區(qū)帶蛋白PZP抗體Anti-CCL3 AntibodyD二聚體(D2D)

大腸埃希菌蛋白香葉烯基轉(zhuǎn)移1β（FTβ）抗體Anti-CCL26 AntibodyDNA損傷誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄因子4樣蛋白(DDIT4/RTP801)

局限青霉原鈣粘蛋白15抗體Anti-CCL7 AntibodyDNA甲基轉(zhuǎn)移3A(DNMT3A)

短波單胞菌屬原鈣粘蛋白β2抗體Anti-CCL4 AntibodyDNA甲基轉(zhuǎn)移1(DNMT1)

小單孢菌原鈣粘蛋白β4抗體Anti-CCL4 AntibodyDnaJ同源亞科B成員1(DNAJB1/DNAJ1/HDJ1/HSPF1)

谷棒桿菌原鈣粘蛋白γ10抗體Anti-CCL6 AntibodyDickkopf相關(guān)蛋白1(DKK1)

里亞氏須腹菌原鈣粘蛋白γA4抗體Anti-CCL5 AntibodyDickkopf 3(DKK3)

短小芽孢桿菌原鈣粘蛋白γA2抗體Anti-CCN1 AntibodyDickkopf 1(DKK1)

蠟狀芽孢桿菌原鈣粘蛋白γA5抗體Anti-CCN2 AntibodyDAB2互作蛋白(DAB2IP)

黑曲霉原鈣粘蛋白γA7抗體Anti-CCN2 AntibodyC型凝集結(jié)構(gòu)域家族4成員E(CLEC4E)

奇異硬皮馬勃原鈣粘蛋白γA8抗體Anti-CCN2 AntibodyC型鈉尿肽(CNP)

原鈣粘蛋白γA9抗體Anti-CCL8 AntibodyC肽(C-Peptide)

: HBUM78192資源名稱: 鏈霉菌 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BR

游動(dòng)放線菌菌種Actinoplanes│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>97%,BR

地衣芽孢桿菌Bacillus│licheniformis 質(zhì)量規(guī)格：>97%,PI3Kβ選擇性抑制劑
Tris凝膠緩沖液ACA11 /FITC  熒光su標(biāo)記兔抗擬南芥ACA11IgG規(guī)格： 0.2ml

AHA3 /FITC  熒光su標(biāo)記兔抗植物蛋白AHA3（擬南芥）IgG規(guī)格： 0.2ml

ABP/FITC  熒光su標(biāo)記雄激su結(jié)合蛋白IgG規(guī)格： 0.2ml

Rat IgA/FITC  熒光su標(biāo)記兔抗大鼠IgA規(guī)格： 0.2ml

ABI1/SSH3BP1/FITC  熒光su標(biāo)記ABI1/SSH3BP1蛋白IgG規(guī)格： 0.2ml

使用方法：

1.  常用篩選濃度

注意：用來(lái)篩選穩(wěn)轉(zhuǎn)株的工作濃度需要根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型，培養(yǎng)基，生長(zhǎng)條件和細(xì)胞代謝率而變化，推薦使用濃度為50-1000μg/mL。對(duì)于第一次使用的實(shí)驗(yàn)體系建議通過(guò)建立殺滅曲線（kill curve），即劑量反應(yīng)性曲線，來(lái)確定最佳篩選濃度。

一般而言，哺乳動(dòng)物細(xì)胞50-500μg/mL；細(xì)菌/植物細(xì)胞20-200μg/mL；真菌300-1000μg/mL。

2. 殺滅曲線的建立

注意：為了篩選得到穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白的細(xì)胞株，需要確定能夠殺死未轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞的抗生素濃度，可通過(guò)建立殺滅曲線（劑量反應(yīng)曲線）來(lái)實(shí)現(xiàn)，至少選擇5個(gè)濃度。

1）  第一天：未轉(zhuǎn)化的細(xì)胞按照20-25%的細(xì)胞密度鋪在合適的培養(yǎng)板上，37℃，CO2培養(yǎng)過(guò)夜；注：對(duì)于需要更高密度來(lái)檢測(cè)活力的細(xì)胞，可增加接種量。

2）  根據(jù)細(xì)胞類(lèi)型，設(shè)定合適范圍內(nèi)的濃度梯度。以哺乳動(dòng)物細(xì)胞為例，可設(shè)定50，100，250，500，750，1000μg/mL。先用去離子水或者PBS buffer按照1:10的比例將母液稀釋到5 mg/ml，然后按照下表稀釋到相應(yīng)濃度的工作液。

3）  第二天：替換舊的培養(yǎng)基，換用新鮮配制的含有相應(yīng)濃度藥物的培養(yǎng)基。每個(gè)濃度做三個(gè)平行孔。

4）  接下來(lái)每3-4天更換新的含藥物培養(yǎng)基。

5）  按照固定的周期（如每2天）進(jìn)行活細(xì)胞計(jì)數(shù)來(lái)確定阻止未轉(zhuǎn)染細(xì)胞生長(zhǎng)的恰當(dāng)濃度。選擇在理想的天數(shù)（通常是7-10天）內(nèi)能夠殺死絕大多數(shù)細(xì)胞的濃度為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞篩選用的工作濃度。

3.   穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞的篩選

1）  轉(zhuǎn)染48h后，用含有適當(dāng)濃度的潮霉素B篩選培養(yǎng)基來(lái)傳代細(xì)胞（直接傳代或者稀釋后傳代）。

注意：細(xì)胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷。則當(dāng)細(xì)胞過(guò)于稠密，其效率會(huì)降低。為了得到較好的篩選效果，最好將細(xì)胞稀釋至豐度不超過(guò)25%

2）  每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養(yǎng)液。

3）  篩選7天后觀察并評(píng)估細(xì)胞克隆（集落）的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細(xì)胞類(lèi)型，轉(zhuǎn)染，以及篩選效果。

4）   挑取并轉(zhuǎn)移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細(xì)胞培養(yǎng)板，繼續(xù)用含藥物的篩選培養(yǎng)液維持培養(yǎng)7天。

5）   之后更換正常培養(yǎng)基培養(yǎng)即可。