詳細介紹
抗體的制備過程:
1. 免疫原:普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原;小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物:常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集:一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定:得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存:抗體一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
產(chǎn)品名稱 | 酰基輔酶A結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體 |
英文名稱 | ACBD4 |
規(guī)格 | 0.2ml |
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公司專業(yè)供應(yīng)的抗體,抗體是用于化學(xué)反應(yīng)、分析化驗、研究實驗、教學(xué)實驗、化學(xué)配方使用的純凈化學(xué)品,產(chǎn)品品質(zhì),價格實惠,多種規(guī)格供應(yīng),售后完善。抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定
得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存
建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
抗體分子標(biāo)記技術(shù):
(一)原理
當(dāng)應(yīng)用化學(xué)氧化法時(NaI)遇強氧化劑,離子被氧化為分子,所生成的自由分子可與某些基團進行鹵化反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子可進行鹵化反應(yīng)的基團主要為酪氨酸殘基,某些組氨酸殘基也可能進行化。在應(yīng)用胺T( Chloramine T)法的實驗中,所用的氧化劑(1,3,4,6- tetrachloro-3a,6adipheny l-glucoluril)強揮發(fā)性的有機溶劑中。該溶劑加入試管后,先讓其揮發(fā)(即讓氧化劑將試管包被),然后把Na125I和蛋白質(zhì)液加入包被好的試管中,反應(yīng)完成即將混合液移入他管終止反應(yīng)。
(二)準(zhǔn)備
1.試劑
經(jīng)親和層析純化的多克隆抗體或單克隆抗體;0.5mol/L磷酸鈉緩沖液,pH7.5;無載體的Na125I3.7GBq/ml(100mCi/ml)的NaOH液;100g/L三醋酸;70%乙醇;新鮮制備的含2mg/m1絡(luò)胺T的0.5mol/L磷酸鈉緩沖液(pH7.5);胺T反應(yīng)終止緩沖液;
2.儀器
凝膠過濾柱;¥-記數(shù)器;玻璃纖維濾。
(三)操作要點
1.用胺T法進行化,也可在大約pH7.0的緩沖液中進行;
2.如果氧化反應(yīng)損傷蛋白質(zhì),可將抗體與異硫氰酸熒光素(FITC)偶聯(lián))胺T量減少到0.02mg/m,并將偏重亞硫酸液的濃度降到0.024mg/ml;
3. Iodogen-包被的試管可在干燥器中,于室溫下保存多年;
4.1251標(biāo)記的抗體,在制備后六周內(nèi)均可使用(1251的半衰期為59.6天);
5.要注意保證所用的Na1251是新鮮的,陳舊制劑的比活性低;
6.酪氨酸的碘化偶爾會對抗原的抗體結(jié)合位點有干擾,因此降低其結(jié)合能力,但這種情況很少見。
抗體制備過程:
1.材料與試劑
a.提取的動物 Ig
b.弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
c.青霉素和鏈霉素
d.實驗動物 兔
e.其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進行動物免疫實驗。
4、試取血樣進行測試,查看免疫效果。
5、如果免疫成功,殺死實驗活體,采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、鑒定抗體。胎牛血清(無菌采制)
αL艾杜糖苷酸酶IDUA英文名稱:Human α-L-iduronidase, IDUA
α2抗纖溶酶α2-AP英文名稱:Human α2-Antiplasmin, α2-AP
L苯丙氨酸解氨酶PAL英文名稱:Human L-Phenylalanine ammonla-lyase, PAL
5核苷酸酶5-NT英文名稱:Human 5-Nucleotidase, 5-NT
肌酸激酶CK英文名稱:Human Creatine Kinase, CK
靶向核糖核酸酶TR英文名稱:Human targeted ribonuclease, TR
蛋白激酶CPKC英文名稱:Human protein kinase C, PKC
醛縮酶ALD英文名稱:Human Aldolase, ALD
L-乳酸脫氫酶L-LDH英文名稱:Human L-Lactate Dehydrogenase, L-LDH
酸性神經(jīng)鞘磷脂酶ASM英文名稱:Human acid sphingomyelinase, ASM
花生四烯酸5脂加氧酶ALOX-5英文名稱:Human arachidonate 5-lipoxygenase, ALOX-5
5脂加氧酶5-LO/LOX英文名稱:Human 5-lipoxygenase, 5-LO/LOX
腺苷酸環(huán)化酶1AC-1英文名稱:Human adenylyl cyclase 1, AC-1
可溶性腺苷酸環(huán)化酶sAC英文名稱:Human Soluble Adenylate Cyclase, sAC
鳥氨酸脫羧酶ODC英文名稱:Human Ornithine decarboxylase, ODC
?;o酶A結(jié)合結(jié)構(gòu)域蛋白4抗體Saccharomyces cerevisiae提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 深層發(fā)酵啤酒酵母。培養(yǎng)基: 0013生長條件: 25-28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
灰平鏈霉菌種屬: Streptomyces griseoplanus分離基物: 草地土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: yes應(yīng)用領(lǐng)域: 模式菌株;產(chǎn)生alazopeptin培養(yǎng)基: 0038生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
普羅菲登斯菌種屬: Providencia sp.提供形式: 其他安全等級: 3模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 41 18培養(yǎng)基: CM0051生長條件: 37℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法
魯氏接合酵母種屬: Zygosaccharomyces rouxii提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 釀造醬油,甜醬。培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28-30℃存儲條件: -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Streptococcus plurextorum模式菌株: 未知
Corynebacterium glutamicum提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 產(chǎn)谷氨酸。培養(yǎng)基: CM0002生長條件: 30℃存儲條件: 真空冷凍干燥法;定期移植法
山夫登堡沙門氏菌種屬: Salmonla senftenberg提供形式: 凍結(jié)物安全等級: 2模式菌株: no應(yīng)用領(lǐng)域: 1,3,19 g,s,t -培養(yǎng)基: CM0051生長條件: 37℃存儲條件: 定期移植法
Streptomyces glaucoviolaceus var. pallens提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: 0012生長條件: 28℃存儲條件: 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
野油菜黃單孢菌種屬: Xanthomonas campestris提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28℃存儲條件: 真空冷凍干燥法